Turkiye Klinikleri J Med Sci 2013;33(2) 478 Malign Plevral Mezotelyoma Hücre Hattında Histon Asetil Transferaz İnhibitörü Olan Anakardik Asitin Sisplatin Cevabını Arttırıcı Etkisi ÖZET Amaç: Malign plevral mezotelyoma (MPM) gelişiminde hücre çoğalması, protein sentezi, enerji üre- timi, hücre iskeletinin yeniden düzenlenmesi ve anjiyogenezde önemli rolleri olan çeşitli sinyal yolakları- nın etkisi olduğu düşünülmektedir. Ayrıca, son yıllarda histon modifikasyonlarını da içine alan epigenetik değişikliklerin kanser gelişiminde etkisi olduğu gösterilmiştir. Bu değişikliklerin MPM’nin ortaya çıkması- na neden olabileceği düşünülmektedir. Günümüzde, MPM tedavisi için klasik kemoterapi ajanlarının ye- ni moleküller ile birlikte kullanılması araştırılarak, daha etkili tedavi seçenekleri belirlenmeye çalışılmaktadır. Bu moleküllerden bir tanesi de histon asetil transferaz (HAT) inhibitörü olan anakardik asittir (AA). Çalışmamızda MPM hücre hattında (MSTO-211H: bifazik), AA ile sisplatinin (CDDP) tek ba- şına ve birlikte kullanılmasının, cMYC, NFKΒ, FOXO3A ve BCL2L1 genlerinin mRNA düzeyindeki ifade- leri üzerine olan etkilerini belirlemeyi amaçladık. Gereç ve Yöntemler: Sisplatin ve AA’nın hücre canlılığı üzerine etkisini belirlemek için 3-(4,5-dimetiltiazol-2-yl)-2,5-difeniltettrazoliyum bromür testi uygulandı. Hücre canlılığı testinin sonucunda seçilen uygun dozlar hücrelere uygulandıktan sonra RNA izolasyonu yapıldı. İzole edilen RNA’lardan kantitatif gerçek zamanlı polimeraz zincir reaksiyonu (qPCR) yöntemiy- le cMYC, NFKΒ, FOXO3A ve BCL2L1 genlerinin mRNA düzeyindeki ifadeleri belirlendi. Bulgular: MSTO- 211H hücrelerine CDDP’nin 10 μM’ın üzerinde uygulanan dozlarının etkili olduğu belirlendi. Hücre canlılığının AA+CDDP uygulanan grupta, CDDP’nin tek başına uygulandığı gruba oranla daha düşük oldu- ğu belirlendi. MSTO-211H hücrelerine AA ön uygulaması, tek başına CDDP uygulamasına oranla araştır- dığımız genlerin mRNA’larının ekspresyon düzeylerinin anlamlı derecede azalmasına neden olduğu saptandı. Sonuç: Elde ettiğimiz veriler, AA ön uygulamasının hücreleri klasik kemoterapi ajanı olan CDDP’ye daha duyarlı hale getirerek etkili bir hücresel ölüm cevabına neden olacağını göstermektedir. Bu preklinik çalışma, MPM gelişiminde epigenetik değişimlerin önemini vurgulamaktadır. Anahtar Kelimeler: Sisplatin; anakardik asitler; histon asetiltransferazlar; mezotelyoma ABSTRACT Objective: Various signaling pathways that play important roles in cell proliferation, translati- on, energy production, cytoskeleton re-organization and angiogenesis are thought to be effective during the development of malignant pleural mesothelioma (MPM). In recent years, it has been shown that epigenetic changes involving histon modifications play important roles in the development of cancer and may also le- ad to emergence of MPM. Currently, more effective treatment options have been investigated by combi- ning new molecules with the classic chemotherapy agents. One of these molecules is anacardic acid (AA), which is a histone acetyl transferase (HAT) inhibitor. In our study, we aimed to determine the effects of AA and cisplatin (CDDP) combination on cMYC, NFKΒ, FOXO3A and BCL2L1 mRNA expression in MPM cell line (MSTO-211H: biphasic). Material and Methods: 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide test was performed to determine the effect of cisplatin and AA on cell viability. RNA isolation was performed after the treatment with selected appropriate doses of the cells. cMYC, NFKΒ, FOXO3A and BCL2L1 mRNA expression levels were determined by quantitative real-time polymeras4e chain reaction method from isolated RNA. Results: We determined that CDDP doses higher than 10 μM were effective on MSTO-211H cells. Cell viability in the group AA+CDDP was lower than the CDDP alone group. Pretreat- ment with AA caused a significant decline in the mRNA expression levels of investigated genes compared to CDDP alone in MSTO-211H cells. Conclusion: Our data demonstrate that pretreatment with AA lead to an effective cell death response by making cells more susceptible to CDDP, a classical chemotherapeutic agent. This preclinical study emphasizes the importance of epigenetic changes in the development of MPM. Key Words: Cisplatin; anacardic acids; histone acetyltransferases; mesothelioma Turkiye Klinikleri J Med Sci 2013;33(2):478-84 Hacer İlke ÖNEN, a Akın YILMAZ, b Ebru ALP, c Ali ÇELİK, d Şevki Mustafa DEMİRÖZ, e Abdullah İrfan TAŞTEPE, e Sevda MENEVŞE a a Tıbbi Biyoloji ve Genetik AD, e Göğüs Cerrahisi AD, Gazi Üniversitesi Tıp Fakültesi, Ankara b Moleküler Biyoloji ve Genetik AD, Avrasya Üniversitesi Fen Edebiyat Fakültesi, Trabzon c Tıbbi Biyoloji ve Genetik AD, Giresun Üniversitesi Tıp Fakültesi, Giresun d 1. Göğüs Cerrahisi Kliniği, Atatürk Göğüs Hastalıkları ve Göğüs Cerrahisi Eğitim ve Araştırma Hastanesi, Ankara Geliş Tarihi/Received: 05.05.2012 Kabul Tarihi/Accepted: 31.10.2012 Bu çalışma, Türk Solunum Araştırmaları Derneği (TÜSAD) tarafından düzenlenen TÜSAD 33. Ulusal Kongresi (15-19 Ekim 2011, İzmir)’nde sözlü bildiri olarak sunulmuştur. Yazışma Adresi/Correspondence: Hacer İlke ÖNEN Gazi Üniversitesi Tıp Fakültesi, Tıbbi Biyoloji ve Genetik AD, Ankara, TÜRKİYE/TURKEY hionen@gazi.edu.tr doi: 10.5336/medsci.2012-30329 Copyright © 2013 by Türkiye Klinikleri ORİJİNAL ARAŞTIRMA