Rev.Colomb.Quim .2015,44 (3),5-10. Química Orgánica y Bioquímica Ana P. Martínez 1* , Sixta T. Martínez 1 , Harold D. Ardila 1 @ °rupo de ânvestigación hstudio de éctividades õetabólicas VegetalesT 8epartamento de QuímicaT wacultad de /ienciasT Universidad Oacional de /olombiaT sede Áogotá6 ÁogotáT /olombia6 /ra6 qz áxP:zqT edificio xP@6 Tel) q@yPzzz6 /ódigo postal) @@@qj@6 *Autor para correspondencia) apmartinezgºunal6edu6co Condiciones para el análisis electrofóretico de proteínas apoplásticas de tallos y raíces de clavel (Dianthus caryophyllus L.) para estudios proteómicos Electrophoretic conditions for analysis of apoplastic proteins in stems and roots of carnation (Dianthus caryophyllus L.) for proteomic studies Condições para a análise eletroforética de proteínas apoplásticas de caules e raízes de cravo (Dianthus caryophyllus L.) para estudos proteômicos Resumen Resumo hn el presente estudio se describe un flujo de trabajo que puede ser aplicado a diferentes especies vegetalesT con el fin de obtener extractos apoplásticos que puedan ser usados para análisis proteómicos6 Rara elloT usando tallos y raíces de clavelT se evaluaron parámetros claves para la extracción de estas proteínas6 Se determinó que para esta especie 4Dianthus caryophyllus ê65 se debe usar la solución amortiguadora fosfato de sodio zT@ õ pô yTPT cloruro de sodio Pz mõ y zT@3 β: mercaptoetanol para la infiltraciónH con tres tiempos de vacío de jz s a Sz kRa y centrifugación a @zzz x g durante jz min a x º/T seguido de precipitación y concentración de proteínas con el método Ácido tricloroacético2acetona6 Áajo estas condicionesT se obtienen extractos que permiten análisis electroforéticos en j8 de proteínas de apoplastoT usando para el isolectroenfoque tiras con gradientes de pô P:( para raíz y pô q:@z para tallo6 êas condiciones descritas permitirán profundizar sobre el papel de las proteínas apoplásticas en diversidad de fenómenos biológicos que involucren esta especie vegetal6 ân the present study a workflowT that can be applied to different plant speciesT to obtain a high quality apoplastic extract and for proteomic analysis is described6 wor thatT using carnation roots and stemsT some important parameters for the extraction of these proteins were evaluated6 The best conditions for the infiltration were provided by using a z6@ õ sodium phosphate buffer pô y6P T Pz mõ sodium chloride and β: mercaptoethanol z6@3T with q vacuum times at Sz kRa for jz s and centrifuged at x°/ at @Tzzz g for jz minT and then a subsequent protein precipitation and concentration with the Trichloroacetic acid2acetone protocol6 These conditions can be used to obtain a good quality extract for j8 electrophoretic analysis of apoplastic proteins6 Strips with pô gradients between P:( and q:@z were used to run isoelectric analysis for extracts obtained from apoplast in roots and stemsT respectively6 The conditions described can be used to perform studies focused on apoplastic proteins and its role in biological phenomena involving this plant species6 Oo presente estudoT é descrito um fluxo de trabalho que pode ser aplicado a espécies vegetais diferentesT para obter extratos apoplásticos que podem ser utilizados para análise proteômico6 Rara istoT utilizando os caules e as raízes do cravoT foram avaliados parâmetros considerados chave para a extração destas proteínas6 woi determinado que para esta espécieT deve ser utilizada uma solução tampão de fosfato de sódio zT@ õ pô yTP com cloreto de sódio Pz mõ e zT@3 β: mercaptoetanol para a infiltraçãoH com três aplicações de vácuo de jz s a Sz kRa e centrifugação a @zzz x g por jz minutos a xº/T e subsequente precipitação e concentração de proteínas usando Ácido tricloroacético2acetona6 Oestas condições se podem obter extratos que permitem a análise eletroforética j8 de proteínas do apoplasto utilizando para a focalização isoeléctrica tiras com gradientes de pô P:( para a raiz e de pô q:@z para o caule6 és condições descritas permitirão aprofundar sobre o papel das proteínas apoplásticas numa diversidade de fenômenos biológicos que envolvem esta espécie de planta6 Palabras clave: fluido apoplásticoT Fusarium oxysporum f6 sp6 dianthiT planta:patógenoT electroforesis6 Keywords: apoplastic fluidT Fusarium oxysporum f6 sp dianthiT plant:pathogenT electrophoresis6 Palavras-Chave: wluido apoplásticoT Fusarium oxysporum f6 sp6 dianthiT patógeno de plantaT eletroforese6 Rev. Colomb. Quim. 2017T 46 4j5T P:@y6 89â) http)22dx6doi6org2@z6@Pxxy2rev6colomb6quim6vxynj6yjLP( 5 Recibido) @q de 9ctubre de jz@y6 éceptado) @x de webrero de jz@S6 Abstract