Ciencia del Suelo 22 (1) 2004 1 PERSISTENCIA EN EL SUELO DE CEPAS DE Sinorhizobium meliloti CC CASTELLARI, AM QUADRELLI FCA-UNMdP, EEA INTA Balcarce. cc 276, CP 7620 Balcarce, BsAs, Argentina. E-mail: aquadrelli@balcarce.inta.gov.ar Recibido 4 de noviembre de 2003, aceptado 23 de abril de 2004 PERSISTENCE OF Sinorhizobium meliloti IN SOILS In order to evaluate the persistence of Sinorhizobium meliloti B399, B58 and B401 strains in the soil, this bacteria population was quantified in seven sites by the NMP method. Conventional microbio- logical protocols and molecular techniques were used for the characterization of S. meliloti isolates. The measured population was 10 2 in inoculated sites and 10 3 in a fallow and an undisturbed site. An homology of B401 strain was detected by molecular techniques in one of the studied sites, where a Lucerne crop, implanted three years ago, was present. Moreover, the molecular techniques allowed to detected the presence of a tolerant acid strain type sp.Or 191. Isolates of sites where the strains were introduced six to nine years before the soil tests start and with no Lucerne did not present an homology with the inoculated strain patrons. Key words : S. meliloti, persistence, fingerprinting. INTRODUCCION La inoculación de semillas de leguminosas con cepas seleccionadas de Rhizobium o Bradirhizobium constituye una práctica agronómica con más de 30 años de aplicación. El objetivo de la inoculación es lograr una nodulación temprana y una efectiva fijación de N 2 . Las cepas a introducir deben cumplir con dos características: capacidad competitiva frente a los rizobios nativos presentes en el suelo y la persistencia en su nuevo ambiente. Este último aspecto es importante cuando las cepas son inoculadas a especies de leguminosas bianuales o perennes que deben satisfacer las necesidades de nitrógeno del cultivo durante un ciclo de vida más prolongado (Rice, Olsen 1992). En muchos casos las semillas de leguminosas inoculadas establecen poblaciones de Rhizobium que inducen la formación de nódulos en el primer año del ciclo de la planta para posteriormente y a través del tiempo la población de rizobios inoculados sea reemplazada progresivamente por rizobios nativos (Jenkins, Bottomley 1985) que son capaces de colonizar las raíces a tasas mayores que las cepas introducidas (Triplett, Sadowsky 1992). Numerosos autores coinciden en que la persistencia de cepas de Rhizobium introducidas constituye un problema importante en la ecología microbiana del suelo. Dowling y Brougton (1986) indicaron que, aunque Rhizobium constituye uno de los principales géneros en la rizósfera, cuando una semilla de leguminosa es inoculada los rizobios deben sobrevivir en nichos donde las condiciones son atípicas hasta el establecimiento de la planta. El seguimiento de la supervivencia de cepas introducidas nos permite estimar la persistencia de las mismas (Broughton et al . 1987). En los últimos años, la aplicación de técnicas moleculares como la del fingerprinting del ADN (De Brujim 1992) han sido utilizadas con éxito para realizar estudios de caracterización, identificación y seguimiento de comunidades microbianas. En el marco de estudio de la disminución de la perdurabilidad de los alfalfares en el sudeste de la Provincia de Buenos Aires, se hipotetizó que las cepas introducidas no persistían luego del primer año de su inoculación y en consecuencia, los rizobios introducidos no contribuirían a lograr una nodulación adecuada y eficiente para el cultivo de alfalfa a través del tiempo. Los objetivos del presente trabajo fueron: 1) determinar en el suelo la persistencia de cepas de Sinorhizobium meliloti introducidas por la inoculación de semillas de alfalfa a través del tiempo; 2) determinar la magnitud de las poblaciones de S. meliloti a distintas profundidades del suelo con el fin de inferir la posible competencia de estas poblaciones