Дворецкая и др. / Сорбционные и хроматографические процессы. 2021. Т. 21. № 6. С. 928-935 928 УДК 577.29 Оценка эффективности экстракции мтДНК из лейкотромбоцитарного слоя крови человека © 2021 Дворецкая Ю.Д. 1,2 , Грязнова М.В. 1,2 , Сыромятников М.Ю. 1,2 , Сержантова О.В. 3 , Михайлов А.А. 3 , Мошуров И.П. 3 , Попов В.Н. 1,2 1 Воронежский государственный университет инженерных технологий, Воронеж 2 Воронежский государственный университет, Воронеж 3 БУЗ ВО «Воронежский областной клинический онкологический диспансер», Воронеж Поступила в редакцию 21.09.2021 г. DOI: 10.17308/sorpchrom.2021.21/3838 Митохондриальная ДНК (мтДНК) широко используется в различного рода исследованиях, так как изменения в мтДНК (мутации или крупномасштабные делеции) могут вызывать широкий спектр заболеваний, таких как диабет, сердечные дисфункции, различные формы рака и т.д. Выделение и ко- личественная оценка мтДНК часто требуются для изучения вклада мтДНК в развитие патологий. Од- нако выделение достаточного количества мтДНК по-прежнему остается трудной задачей. Целью данного исследования была оценка и сравнение трех методов экстракции мтДНК из лейкотромбоцитарного слоя крови человека. В основе всех выбранных нами наборов для выделения ДНК лежит метод сорбционной экстракции, принцип которой заключается в особых свойствах носите- лей на основе кремния для селективного связывания ДНК. Также оценивалось влияние двух широко используемых типов антикоагулянтов на эффективность экстракции мтДНК. Посредством систематического сравнения методов выделения мтДНК мы определили проце- дуру, обеспечивающую наибольший выход мтДНК, которая, как мы показываем, демонстрирует высо- кую производительность в последующих анализах. Для экстракции мтДНК были взяты образцы лейкотромбоцитарного слоя крови у 12 добро- вольцев и использовались три различных протокола выделения (Quick-DNA Miniprep Plus (Zymo Research, США), Plasmid miniPrep (Evrogen, Россия) и набор QIAamp® Blood Mini Kit (QIAGEN, Гер- мания)). Далее проводилась оценка количества ДНК с помощью флуориметрии и количественной по- лимеразной цепной реакции. Полученные результаты показали, что из исследуемых методов выделения ДНК, экстрагиро- ванная с помощью набора QIAamp® Blood Mini Kit (QIAGEN, Германия), который основан на приме- нении колонок с силикагелевой мембраной, дает оптимальную концентрацию мтДНК. Разницы между количествами мтДНК, выделенными из крови с различными антикоагулянтами обнаружено не было. Наши результаты подчеркивают важность выбора метода изоляции мтДНК, так как этот этап является определяющим для получения высококачественной мтДНК, которая будет пригодна для дальнейших молекулярно-генетических исследований. Ключевые слова: митохондриальная ДНК, qPCR, флуориметрия, выделение ДНК. Введение Митохондрии — это внутриклеточные органеллы, участвующие в производстве энергии в процессе окислительного фос- форилирования, которые имеют соб- ственный геном (мтДНК), отличный от генома в ядре клетки (яДНК). Хотя мито- хондриальная масса на клетку варьиру- ется в зависимости от типа клетки и со- стояния метаболизма, каждый тип клеток обычно содержит довольно постоянное количество митохондрий и, соответ- ственно, количество копий митохондри-