Congrès SFD 2017 – Lille A43 Diabetes Metab 2017, 43, A38-A50 SFD trations croissantes d’insuline (10 nM, 100 nM) induisent une diminution signi- ficative des niveaux d’expression du 26RFa. Conclusions Nos résultats montrent pour la première fois que le 26RFa peut réguler la glycémie par une action centrale se caractérisant par un effet anti- hyperglycémiant au moins partiellement expliquée par une augmentation de la sécrétion d’insuline. De plus, il apparait que les neurones hypothala- miques exprimant le 26RFa sont sensibles à l’insuline. L’ensemble de ces résultats suggère que le système peptidergique 26RFa-GPR103 de l’hypo- thalamus est impliqué dans la régulation centrale de glycémie. Des études complémentaires sont nécessaires pour évaluer l’impact de ce système pepti- dergique hypothalamique dans la physiopathologie de l’obésité associée au diabète de type 2. Mots-Clés Glycémie, Sécrétion d’insuline, système nerveux central Les auteurs déclarent ne pas avoir d’intérêt direct ou indirect (financier ou en nature) avec un organisme privé, industriel ou commercial en relation avec le sujet présenté. CAD-16 Étude de l’effet du dulaglutide, analogue du GLP1, sur la protection des cellules bêta dans un modèle de stress inflammatoire mimant la greffe d’îlots pancréatiques Guillaume Kreutter (1) , Ali El Habhab (2) , Mohammad Kassem (2) , Sarah Hassan (2) , Blandine Yver (2) , Lamia Amoura (2) , Genevieve Ubeaud- Sequier (2) , Florence Toti (2) , Laurence Kessler (2) 1 Université de Strasbourg, EA 7293, STRASBOURG, France, 2 EA 7293 Stress Vasculaire et Tissulaire en Transplantation, Université de Strasbourg, Fédération de Médecine Translationnelle, France, Strasbourg, France. *Auteur correspondant Guillaume.kreutter@gmail.com Introduction La greffe d’îlots pancréatiques est associée à une réaction inflam- matoire précoce, détruisant les îlots transplantés, caractérisée par l’émission de Microparticules (MP) procoagulantes, de cytokines pro-inflammatoire et l’acti- vation de la cascade coagulation par le facteur tissulaire (FT). Les MP, vésicules de membrane plasmique émises par la cellule en réponse au stress, sont des marqueurs circulants et des effecteurs cellulaires. Nous avions étudié l’effet du dulaglutide, sur la prévention de la dysfonction de la cellule beta dans un modèle in-vitro mimant la réaction d’ischémie/reperfusion. Matériels et Méthodes Des cellules ß de rat (Rin-m5f) ont été soumises pendant 24h à un stress pro-inflammatoire par traitement cytokinique (cyt : TNF-α 1000 UI/ml, IL1β 50 UI/ml, Interferon-γ 1000 UI/ml) en présence de dulaglu- tide (0,05 à 1 μM). L’antagoniste du récepteur du GLP1, l’exendine (200 nM), a été préincubé 1h avant le dulaglutide afin d’identifier les mécanismes GLP1R dépendants et indépendants. L’apoptose des cellules ß a été mesurée par cyto- métrie en flux avec double marquage Iodure de propidium/ Annexine 5. La libération de microparticules a été évaluée dans le surnageant par dosage pro- thrombinase, l’insuline secrétée dans le surnageant par ELISA. L’activité FT, reflet de la quantité de facteur tissulaire présente à la surface de la cellule beta, a été mesurée 6h après traitement cytokinique par méthode chromogénique du complexe de la Tenase. Résultats Le dulaglutide exerce une activité anti-apoptotique sur les cellules beta soumise à un stress cytokinique et restaure la sécrétion d’insuline à forte concentration (Apoptose % IP/An5+ Contole : 8 ± 1 %, Cytokines : 17 ± 1, 1 μMDula8 ± 1 %, 0,2 μM Dula 13 ± 1, 0,05 μMDula 14 ± 1 %, p < 0,01, n = 4). Le prétraitement des cellules par l’exendine limite très fortement l’effet protec- teur du Dulaglutide, indiquant que cette cytoprotection est en partie dépen- dante du récepteur GLP1 (Apoptose Cyt : 17 ± 1, Dula : 9 ± 2, Exendine : 14 ± 1 %, n = 4). Le dulaglutide limite la libération de microparticules induites ou non par le stress cytokinique par un mécanisme GLP1 dépendant (Contrôle : 8,5 ± 0,3 ; Dula 1μM 6,3 ± 0,5 ; Cyt : 12,2 ± 0,5, Cyt+Dula 1 : 10,6 ± 0,1, Exendine : 12,8 ± 0,7, p < 0,01, n = 4). Le dulaglutide diminue la quantité de facteur tissulaire présente à la surface de la cellule ß en réponse à un stress inflammatoire (activité FT Contrôle : 95 ±.11, Cyt : 211 ± 27, Dula : 113 ± 5, Exendine : 95 ± 20 fMol FT/50’000 cellules, p < 0,05). Cette réponse est indé- pendante du récepteur GLP1. Conclusions En conclusion, le dulaglutide exerce à forte concentration une cyto- protection des cellules ß par une effet anti-inflammatoire lié au récepteur du GLP1 et par d’autres voies non- GLP1R dépendantes impliquées dans le remo- delage membranaire et la libération de microparticules. Une étude des méca- nismes impliquées ainsi que de l’effet de cet analogue du GLP1 sur la survie des îlots sera réalisée afin de déterminer si l’utilisation de ce médicament serait bénéfique au cours de la greffe d’îlot pancréatique. Travail réalisé grâce au soutien de Lilly Mots-Clés Incrétine, Greffe d’îlots, Thérapeutique Les auteurs déclarent ne pas avoir d’intérêt direct ou indirect (financier ou en nature) avec un organisme privé, industriel ou commercial en relation avec le sujet présenté. CAD-17 Production in vitro d’îlots pancréatiques humains à partir de cellules souches pluripotentes induites Alix Vaissie (1) , Gianni Pasquetti (1) , Julien Thevenet (1) , Audrey Quenon (1) , Rimed Ezzouaoui (1) , Thomas Hubert (1) , François Pattou (1) , Julie Kerr- Conte (1) 1 Inserm U-1190 – European Genomic Institute for Diabetes (EGID), Lille, France. *Auteur correspondant fpattou@univ-lille2.fr Introduction L’utilisation d’îlots humains pour la recherche sur le diabète est primordiale. Mais ils sont hétérogènes et la demande des laboratoires dépasse les quantités disponibles (Kulkarni Stewart 2014). Leur différencia- tion à partir des cellules souches semble être une perspective d’avenir. La première génération de protocoles permettait la production de cellules Ins/ Gcg positives mais sans réponse au glucose, alors que la deuxième généra- tion de protocole permet l’obtention de cellules mono-hormonales avec réponse au glucose et guérison du diabète en 6semaines chez la souris. Notre but était de mettre en place cette technologie pour produire des îlots pancréatiques à partir de cellules iPS. Matériels et Méthodes De 2013 à 2015, deux protocoles de première génération en 4 stades ont été testés à partir d’iPS DF 19,9 (Wicell) : l’un provenant de J. Odo- rico (accord de confidentialité, UW) et l’autre publié par A. Rezania en 2012. Apres différenciation in vitro, les cellules ont été comparées aux îlots humains (pool de 10 donneurs) par qPCR et immunofluorescence. En 2016, le StemDiff Pancreatic Progenitor Kit, protocol en 4 stades, commer- cialisé par StemCell Technologies et le protocole de deuxième génération en 7 stades, publié par A. Rezania (2014) ont été testés. Après différenciation, les cellules de Stade 4 ou de Stade 7 ont été greffées chez la souris immunodéprimée pour la maturation in vivo (2-6 mois), la glycémie et le c-peptide à jeun ont été mesurés toutes les deux semaines. Résultats Les protocoles en 4 stades (n = 13) permettent d’observer, au cours de la différenciation in vitro, une augmentation progressive de Pdx1, de Nkx6.1, de l’insuline et du glucagon (qPCR). Cependant l’expression d’insuline et de glucagon restent à plusieurs log d’écart (3 pour l’insuline et 2 pour le glucagon) par rapport à celles exprimées par les îlots humains, et nous observons la pré- sence de cellules poly-hormonale (Ins/Gcg) (également rapportée par la littéra- ture). Après transplantation, les cellules greffées au stade 4 montrent une sécrétion de c-peptide humain inférieure à 200ng/L et 10,5 % de tératomes. Les cellules de stade 4 différenciées à l’aide du StemDiff Kit montrent un enrichis- sement en Pdx1 et Nkx6.1 comparées aux cellules différenciées avec les proto- coles d’Odorico ou Rezania, avec des expressions comparables à celles des îlots humains. Lorsqu’on allonge la différenciation in vitro jusqu’au stade 7 (> 30 jours) on observe une augmentation de l’expression des gènes pancréatiques (Ins, Gcg, ChromoA, Nkx6.1, Pdx1 et CK19). Les cellules greffées à la fin du Stade 7 montrent, après 10 semaines in vivo, une sécrétion de c-peptide humain proche de celle des îlots humains (500 îlots humains : 500ng/L) malgré la persistance de la formation de tératomes. Conclusions Nos résultats reproduisant les protocoles de première génération à partir de la lignée iPS DF19,9 confirment l’expression hormonale des cellules différenciées (bien qu’à certains logs en dessous de celle des îlots humains) simi- laire au phénotype fœtal. Nos résultats préliminaires à partir des protocoles de deuxième génération montrent une augmentation de l’expression des marqueurs pancréatiques après différenciation in vitro, et une augmentation de la sécrétion de c-peptide humain après 10 semaines de maturation in vivo (comparable à celle des îlots humains). Mots-Clés Greffe d’îlots, Pancréas, Ilot pancréatique Les auteurs déclarent ne pas avoir d’intérêt direct ou indirect (financier ou en nature) avec un organisme privé, industriel ou commercial en relation avec le sujet présenté. CAD-18 Altération du taux sérique de miR-375 à la découverte du diabète de type 1 Lucien Marchand (1) , Marc Nicolino (2) , Sophie Rome (3) , Charles Thivolet (1) 1 CHU de Lyon, Centre Hospitalier Lyon Sud, Lyon, France, 2 CHU de Lyon, Hôpital Femme Mère Enfant, Lyon, France, 3 Laboratoire CarMeN, INSERM UMR-1060/INRA 1397, Université Lyon 1, Lyon, France. *Auteur correspondant lucien.marchand@chu-lyon.fr Introduction Le diabète de type 1 (DT1) est une maladie chronique auto- immune caractérisée par la destruction des cellules bêta pancréatiques. La caractérisation de biomarqueurs évaluant la masse/fonction des cellules bêta résiduelles est un enjeu clinique dans les phases précoces de la maladie. Les micro-ARN (miRNA) sont de courts acides ribonucléiques non codants inhibant l’expression de nombreux gènes à un niveau post-transcriptionnel. L’implication des miRNA dans la physiopathologie du DT1 et leur poten- tiel rôle en tant que biomarqueur ont été peu étudiés. Nous avons cherché à UntitledBook1.book Page 43 Monday, March 6, 2017 7:59 AM