Mem. Inst. Investig. Cienc. Salud, Vol. 10(1) Junio 2012: 5-13 5 *Autor Correspondiente: Dra.(PhD) Rosa María Guillén Fretes, Dpto. de Biología Molecular y Genética, Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud-Universidad Nacional de Asunción. Email microbiologia@iics.una.py. Fecha de recepción:marzo de 2012, Fecha de aceptación: mayo 2012 ARTICULO ORIGINAL PCR múltiple para la detección simultánea de los genes mecA y pvl en Staphylococcus spp Multiplex PCR for simultaneous detection of mecA and pvl genes in Staphylococcus spp Carpinelli Acevedo ML I , *Guillén Fretes RM II , Fariña NJ I Basualdo W III Aquino R III I Departamento de Análisis Clínicos y Microbiología, Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud-Universidad Nacional de Asunción. Paraguay II Departamento de Biología Molecular y Genética, Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud-Universidad Nacional de Asunción. Paraguay III Departamento de Epidemiología y Control de infecciones. Hospital General Pediátrico Niños de Acosta Ñú. Ministerio de Salud Pública y Bienestar Social. San Lorenzo-Paraguay RESUMEN Este estudio observacional descriptivo de corte transverso tuvo por objetivo estandarizar una PCR múltiple para la detección simultánea de los genes mecA y pvl en Staphylococcus spp. Se emplearon como cepas control: S. aureus ATCC 25923, S. aureus ATCC 43300 y un aislado de S. aureus portador de los genes mecA y pvl. La extracción de ADN se realizó por el método de ebullición. El límite de detección se estableció por medio de diluciones seriadas de ADN. Se determinó la aplicabilidad de la PCR múltiple testando 41 aislados de S. aureus y 51 Estafilococos coagulasa negativo (ECN) previamente caracterizados por métodos fenotípicos en noviembre del año 2009. Los productos de PCR fueron visualizados por electroforesis en gel de agarosa al 2% previa tinción con bromuro de etidio. Los productos de amplificación de la PCR múltiple presentaron tamaño esperado de 533pb y 433pb para los genes mecA y pvl respectivamente, con límites de detección de hasta 0,5 ng/µL. El gen mecA se detectó en 13 (31,7%) aislados de S. aureus y en 29 (56,7%) ECN. El gen pvl se detectó en 2 (4,9%) S. aureus y no fue detectado en ECN. La presencia del gen mecA tuvo 100% de concordancia con los métodos fenotípicos. Esta técnica es una herramienta útil en la confirmación de cepas de Estafilococos meticilino resistentes e identificación del gen pvl, además de ser relativamente sencilla con la ventaja de detectar ambos genes en una sola reacción. Palabras claves: Staphylococcus aureus, Estafilococos coagulasa negativos, meticilino resistencia, gen mecA, gen pvl. ABSTRACT The aim of this cross sectional observational study was to standardize a multiplex PCR for simultaneous detection of mecA and pvl genes in Staphylococcus spp. S. aureus strains ATCC 25923 and S.aureus ATCC 43300 were used as controls as well as an isolate of S. aureus carrying mecA and pvl genes. The boiling method was performed for DNA extraction and the detection limit was established by serial dilutions of DNA. We determined the applicability of the multiplex PCR by testing 41 isolates of S. aureus and 51 coagulase negative staphylococci (CNS) previously characterized by phenotypic methods in november 2009. The PCR products were visualized by agarose gel electrophoresis in 2% after ethidium bromide staining. The size of the amplified products of the multiplex PCR corresponded to those expected, 433bp for mecA and 533bp for pvl, with detection limits up to 0.5 ng/µL. The mecA gene was detected in 13 (31.7%) isolates