Hioppe-Seyler's Z. Physiol. Chem. Bd. 363, S.425-430, April 1982 Synthesis and Processing of Arylsulfatase A in Human Skin Fibroblasts Abdul WAHEED*, Andrej HASILIK and Kurt VON FIGURA Physiologisch-Chemisches Institut der Universität Münster (Received 28 December 1981) Summary: Biosynthesis of arylsulfatase A in normal and mutant human fibroblasts was studied by growing cells in the presence of L - [4,5- 3 H]leucine or [2- 3 H]mannose, isolation of labelled arylsulfatase A by immune precipitation and visualization of electrophoretically separated polypeptides by fluorography. Arylsulfatase A was synthesized as a precursor with a mean ap- parent molecular mass of 62 kDa. Intracellularly the precursor was converted into a 60.5 kDa poly- peptide within a chase period of 1 to 7 days. The 60.5 kDa product in polyacrylamide corresponded to one of two polypeptides present in arylsul- fatase A isolated from human placenta. In fibro- blasts from a patient with metachromatic leuko- dystrophy no immune precipitable polypeptides of arylsulfatase A were detected. In normal fibro- blasts less than 10% of the precursor of arylsul- fatase A was secreted into the medium, whereas in mucolipidosis II fibroblasts and in control fibroblasts grown in the presence of NH4C1 up to 90% of the precursor of arylsulfatase A, appeared in the medium and remained there without change in the apparent molecular mass for at least 7 days. Arylsulfatase A polypeptides appear to contain two carbohydrate side chains. In about 90% of the polypeptides both side chains are cleaved by endo-ß-yV-acetylglucosaminidase H, whereas in the remaining chains one of the two oligosaccharides is not cleaved. Synthese und höhermolekulare Vorstufen (processing) von Arylsulfatase A in menschlichen Hautfibrob lasten Zusammenfassung: Arylsulfatase A wurde durch Immunpräzipitation aus Zell- und Mediumextrak- ten von normalen und mutanten menschlichen Fibroblasten isoliert, die in Gegenwart von L- [4,5- 3 H]Leucin bzw. [2- 3 H]Mannose inkubiert worden waren. Die Immunpräzipitate wurden solubilisiert und die radioaktiven Polypeptide nach gelelektrophoretischer Auftrennung durch Fluorographie sichtbar gemacht. Arylsulfatase A wird als ein Polypeptid mit einer mittleren Molekularmasse von 62.5 kDa synthetisiert. Diese 62.5-kDa-Form der Arylsulfatase ist eine Vor- stufe und wird innerhalb von 7 Tagen zu einem Polypeptid mit einer mittleren Molekularmasse von 60.5 kDa verkürzt, das einer der beiden Aryl- sulfatase-A-Formen aus menschlicher Plazenta Enzymes: Arylsulfatase A, aryl-sulfate sulfohydrolase (EC 3.1.6.1); Endo-j3-7V-acetylglucosaminidase H, mannosyl-glycoprotein l,4-7V-acetamidodeoxy-/3-D-glycohydrolase (EC 3.2.1.96). * Recipient of an Alexander von Humboldt fellowship 00184888/82/0363-0425$02.00 © Copyright by Walter de Gruyter & Co · Berlin · New York Brought to you by | Purdue University Authenticated Download Date | 5/31/15 5:14