12 Prometech Journal www.promega.co.jp Number 20 2006 アブストラクト HaloTag TM Interchangeable Labeling Technology 、 また in vitroにおいてタ パク の 位 異 な を に える しい を します。このテクノ ジー 、 HaloTag TM タ パク と 々な を する ガ ドとの をベースにして います。 で に されるこの 、 異 が く に であり、変 で 安 した を します。 イントロダクション タ パク を 異 に できるか か 、 におけるタ パ ク のダイナミクス を する で な となります(1)。し かし、 の く 、 タグを つタ パク を し、それら を のネイティブな でイメージ グする のでした。このよ うな がかかるとと に、タ パク の を し、 しか を にうまくマイク イ ジェクシ する があり、 なテクニックと です(2)。一 、遺 を ク ーニ グし、それを にト スフェクシ することで し く される（de novo）タ パク 、ネイティブなタ パク と のタ パク パター をとると えられています。遺 を したタ パク の によって、 に する がより くなりました。 HaloTag TM Interchangeable Labeling Technology HaloTag TM Interchangeable Labeling Technology 、 タ パク のイメージ グ、 、 に な です。HaloTag TM タ パク ク ア カ - ガ ドと 、 異 に し、この ガ ド に 々な ケミカ -タグを する が されています。 な ガ ドの により異なる でのイメージ グが で す。また、ビオチ を した ガ ド スト プトアビジ を いたタ パク の などのアプ ケーシ に できます。 たった1つのDNAコ スト クトだけでHaloTag TM テクノ ジーの な を することができます。HaloTag TM テクノ ジーを い て タ パク を するに 、HaloTag TM タ パク をコード する1つのコ スト クトをト ジェ トまた ステイブ なト スフェクシ により に します。 、HaloTag TM タ パク の のベクター3 （HaloTag TM pHT2 Vector 、pFC8A、 pFC8K（HaloTag TM ）CMV Flexi ® Vector）が できます。 に、 の ガ ドを する 、 を な ガ ドとと に 5-60 イ キュベーシ します。 ガ ド を し、 HaloTag TM タ パク に します。 の ガ ドを により した 、以 のアプ ケーシ に います。 の ガ ドあるい HaloLink TM を した 、HaloTag TM ガ ド とのイ キュベーシ を う に を します。 1 に HaloTag TM TMR Ligand で したp65- HaloTag TM タ パク を する のイメージを します。 HaloTag TM Interchangeable Labeling Technologyの構成内容 HaloTag TM タ パク 、 ヒド ーゼに し、 HaloTag TM Ligandとの を させるために遺 えを っ たタ パク です（ 2）。この33kDaの タ パク とのN あ るい C 々な で よく させることができま す。HaloTag TM タ パク に しないので、 い 異 を します。HaloTag TM pHT2 Vectorに 、 くの において かつ な を こすCMVエ ハ サー／プ モーター、5'- ドナースプ イスサイトの を に えるキメ ・イ ト 、 in vitro ／ システムに するT7プ モーター、HaloTag TM タ パク コード そしてSV40 lateポ アデニ シグナ が まれて います(3)。 の に え、pFC8A および pFC8K（HaloTag TM ） CMV Flexi ® Vector に HaloTag TM パートナーと 異 に するタ パク を するために するFactor Xa 位が まれ ます（ 4, 7 ）。 HaloTag TM Technology: Cell Imaging and Protein Analysis By G. Los, Ph.D. 1 , R. Learish, Ph.D. 1 , Natasha Karassina, M.S. 1 , Chad Zimprich, B.S. 1 , Mark G. Mcdougall, Ph.D. 2 , Lance P. Encell, Ph.D. 1 , Rachel Freidman-Ohana, Ph.D. 1 , Monika Wood, M.S. 1 , Gediminas Vidugiris, Ph.D. 1 , Kris Zimmerman, B.S. 1 , Paul Otto, M.S. 1 , Soshana Berhstock, Ph.D. 1 , Dieter H. Klaubert, Ph.D. 2 , and Keith V. Wood, Ph.D. 1 , 1 Promega Corporation, 2 Promega Biosciences, Inc. HaloTag TM Technology：細胞イメージングおよびタンパク質分析 4883TA A B C D 図1. p65-HaloTag TM タンパク質を発現し、HaloTag TM TMR Ligandで標識した細 胞の固定後のイメージング HeLa にp65-HaloTag TM タ パク をコードするプ スミドをト ジェ トにト スフェクシ し、 したp65-HaloTag TM タ パク を5μM HaloTag TM TMR Ligandで37℃、15 した(3)。 3.7% パ ホ ムア デヒドで した 、1μg/ml mouse Anti-βIII Tubulin Antibody（カタ グ G7121）およびAlexa Fluor TM -488-conjugated goat-antimouse IgG（Molecular Probes）を いて した。イメージ オ パス FV500 （TMRま た Alexa Fluor TM に したフィ ターセットまた を いたシーケ シャ モード）により 影。パネルA. TMR 。パネルB. Alexa Fluor TM -488 。 パネルC. Alexa Fluor TM -488およびTMR および のオーバー イ。パネル D. Alexa Fluor TM -488およびTMR のオーバー イ。