S436 CARD 2016 CO36 Conséquences fonctionnelles de faibles doses de rayons gamma sur les précurseurs épidermiques Sophie Cavallero ∗ , Renata Neves-Granito , Michèle Martin , Nicolas Fortune Laboratoire de génomique et de radiobiologie de la kératinopoïèse, CEA/DRF/IRCM-Inserm UMR967, Evry, France ∗ Auteur correspondant. Introduction Lors d’un diagnostic médical utilisant les rayons gamma, la peau est le premier organe du corps humain touché. Bien que délivrant de très faibles doses, l’utilisation croissante de ces techniques conduit à réévaluer leurs conséquences à long terme au niveau de la santé publique, et notamment de la cancé- rogenèse cutanée. Notre étude s’est centrée sur les conséquences d’une exposition à faible dose pour les kératinocytes de la couche basale de l’épiderme, car les précurseurs épidermiques constituent la population la plus à risque pour le développement de carcinomes. Matériel et méthodes Pour cette étude, nous avons utilisé un modèle de xénogreffe de peau reconstruite humaine chez la sou- ris immunodéficiente. La peau humaine est générée en cultivant des précurseurs de kératinocytes ayant une forte capacité de régé- nération (kératinocytes issus d’holoclones), sur un gel de fibrine contenant des fibroblastes humains. Elle est ensuite irradiée puis greffée à des souris nude. Vingt jours après la greffe, la peau humaine est prélevée et incluse en paraffine. Résultats Une analyse histo-morphométrique réalisée sur les coupes de greffons montre qu’une dose de 50 mGy n’empêche pas la reconstitution de l’épiderme mais altère sa qualité. Des anomalies présentes dans l’ensemble des greffons montrent une altération de la kératinopoïèse, illustrée notamment par un élargis- sement significatif des espaces intercellulaires et une surexpression de la kératine 5. Plus localement, des zones présentent une dys- plasie épithéliale, caractérisée par une forte désorganisation des couches de l’épiderme et une migration anormale de cellules dans le derme. Ces zones dysplasiques sont trouvées dans 50 % des greffons exposés à 50mGy. Une perte significative de pola- rité apico-basale des kératinocytes de la couche basale étant observée dans ces zones dysplasiques, un processus de transition épithélio-mésenchymateuse (EMT) a été recherché. Des anomalies dans l’expression de la b-caténine sont observées, conjointement à l’apparition de la protéine ZEB1. Ce facteur de transcription n’est exprimé normalement que dans le derme et il est connu pour jouer un rôle clé dans le processus d’EMT. Discussion En résumé, l’ensemble des résultats suggère qu’une fraction des précurseurs de kératinocytes exposés à une très faible dose d’irradiation conserve une mémoire génétique ou épigénétique de cette exposition qui peut favoriser un processus de transforma- tion cellulaire. Mots clés EMT ; Kératinopoïèse ; Radiobiologie Déclaration de liens d’intérêts Les auteurs déclarent ne pas avoir de liens d’intérêts. http://dx.doi.org/10.1016/j.annder.2016.09.088 CO37 MicroARNs et vieillissement épidermique : criblage génomique et analyse fonctionnelle du cluster miR30a-miR30c Charlotte Muther ∗ , Choua Ya , Jérôme Lamartine Laboratoire de biologie tissulaire et ingéniérie thérapeuthique (LBTI), CNRS 5305, université Lyon I, Lyon, France ∗ Auteur correspondant. Introduction Dans l’épiderme, les altérations liées à l’âge sont essentiellement caractérisées par un défaut dans le renouvellement du tissu. Une prolifération réduite des kératinocytes et une pertur- bation de leur différenciation en sont les principales causes. Les voies moléculaires impliquées dans l’homéostasie de l’épiderme ont été largement étudiées ces dernières années, néanmoins les mécanismes de leur perturbation au cours du vieillissement restent mal connus. Afin de répondre à cette question, nous avons foca- lisé notre étude sur les microARNs (miARNs) car ces régulateurs de l’expression génique jouent un rôle important dans le contrôle de l’homéostasie épidermique. Matériel et méthodes Afin d’analyser l’expression des miARNs au cours du vieillissement chronologique, nous avons effectué un crible exhaustif par puce à ADN des miARNs exprimés dans des kératino- cytes primaires en culture provenant d’individus jeunes ou âgés, ainsi qu’entre des tissus épidermiques d’individus jeunes ou âgés. Pour l’analyse fonctionnelle, les microARNs ont été surexprimés en utilisant un système lentiviral ou par transfection transitoire de molécules précurseurs. Les cibles génomiques des miARN ont été validées par analyse d’expression et test luciférase. Résultats Le crible effectué dans les cellules et les tissus épi- dermiques jeunes vs. âgés nous a permis de mettre en évidence de nombreux miARNs dont l’expression est impactée par le vieillisse- ment dont miR30a et miR30c, membres du même cluster. Nous avons également montré que miR30a et miR30c sont significativement induits dans un modèle de peau reconstruite mimant le vieillisse- ment chronologique. Enfin, nous avons observé une induction de miR30a dans les kératinocytes en sénescence, un des mécanismes majeurs du vieillissement des tissus humains. Nous avons donc foca- lisé nos études fonctionnelles sur miR30a et miR30c : nous observons qu’une surexpression conjointe de ces 2 miARNs dans des kératino- cytes humains freine la différenciation induite par le calcium sans impact sur la prolifération cellulaire. Des études similaires dans un modèle d’épiderme reconstruit sont en cours d’analyse. Nous avons ensuite recherché des cibles génomiques par analyse de la litté- rature et crible d’expression. Plusieurs cibles potentielles ont été identifiées dont le gène LOX codant la lysyl oxydase, dont le rôle dans la balance prolifération/différenciation des kératinocytes a été récemment décrit. Nous avons confirmé la régulation directe de LOX par miR30a-30c dans les kératinocytes et la diminution d’expression de LOX dans la peau âgée. Conclusion Le répertoire complet des cibles de miR30a-30c et les mécanismes conduisant à l’induction de ces miARNs dans la peau âgée restent à clarifier. Néanmoins, nos travaux mettent à jour de nouveaux acteurs et de nouveaux mécanismes pour expliquer certaines des altérations de l’épiderme au cours du vieillissement. Mots clés Épiderme ; MicroARN ; Vieillissement Déclaration de liens d’intérêts C. Muther a rec ¸u une subvention de la part de la région Rhône-Alpes. Les autres auteurs déclarent ne pas avoir de liens d’intérêts. http://dx.doi.org/10.1016/j.annder.2016.09.089 CO38 Développement d’un modèle d’épiderme reconstruit murin : caractérisation histologique et réponse aux cytokines proinflammatoires Mathilde Pohin 1 , Carolina Veaute 2 , Julien Garnier 3 , Christine Barrault 3 , Laurent Cronier 4 , Laure Favot 1 , Franc ¸ois-Xavier Bernard 3 , Jean-Claude Lecron 1,5 , Franck Morel 1 , Jean-Franc ¸ois Jégou 1,∗ 1 LITEC, EA433, université de Poitiers, Poitiers, France 2 Universidad Nacional del Litoral, Santa Fe, Argentine 3 Bioalternatives, Genc ¸ay 4 STIM, CNRS ERL 7368, université de Poitiers 5 CHU de Poitiers, Poitiers, France ∗ Auteur correspondant.