Nutrición y Alimentación Animal 43º Congreso Argentino de Producción Animal REVISTA ARGENTINA DE PRODUCCIÓN ANIMAL VOL 40 SUPL. 1: 369-404 (2020) 403 Introducción La producción entérica de metano (CH4) en rumiantes, junto al impacto ambiental que representa, es una pérdida energética para el animal que puede representar el 7% (Hristov et al. 2013). La inclusión de metabolitos secundarios como el aceite esencial eugenol (EU) o el glucósido cianogénico linamarina (LIN) en la dieta podría reducir la producción de CH4 (Zavaleta et al. 2019). Dicha reducción podría estar asociada a la disminución de metanógenos o a una mayor producción de propionato. El objetivo del presente estudio fue evaluar in vitro, el efecto de la inclusión de LIN, EU y la mezcla de ambos, sobre la digestibilidad de la dieta, metanogénesis, bacterias totales y metanogénicas. Materiales y métodos El ensayo se realizó en el Laboratorio de Nutrición y Sistemas Ganaderos de la Universidad de Concepción, Chile. La metodología se basó en la técnica Tilley y Terry (1963). Los tratamientos fueron: T1, control; T2, LIN (20 mg/L); T3, LIN (40 mg/L); T4, EU (400 mg/L); T5, LIN+EU (20 + 400 mg/L); y T6, LIN+EU (40 + 400 mg/L). El inóculo se preparó mezclando el líquido ruminal (LR) de una vaca canulada de raza Aberdeen Angus, alimentada con una dieta de heno de alfalfa (Medicago sativa) y grano de avena (Avena sativa) en una proporción 3:1. En frascos ambar de 50 mL, se dispuso 0,5 g de la dieta en bolsas ANKOM® (modelo F57, Macedon, NY, EE.UU.). El LR, fue recolectado en fase líquida y sólida, se filtró y vertió a la solución buffer a 39 °C, en relación 1:3. Se vertieron 25 mL del inóculo a las botellas con dióxido de carbono. Los frascos fueron dispuestos en la incubadora a 39 °C, donde permanecieron hasta la toma de datos. Por cada tratamiento se incubaron tres repeticiones durante 24 h; el ensayo se repitió tres veces. Las variables evaluadas fueron: producción total de gas mediante desplazamiento de agua, extrayéndose previamente una muestra de volumen conocido para el análisis de CH4, por cromatografía de gases. Se determinó la desaparición in vitro de materia seca (DIVMS) y pH. Se extrajo ADN para realizar la cuantificación de bacterias totales y metanogénicas por medio de qPCR. El diseño experimental fue en bloques completos. El análisis estadístico se realizó ajustando un Modelo Lineal Mixto. La comparación de medias se realizó con Tukey (p≤0,05). Los datos se analizaron utilizando la plataforma R, dentro del software estadístico InfoStat®. Resultados y Discusión Los tratamientos no tuvieron efecto (p=0,80) sobre la producción total de gas. Sin embargo, sí lo tuvieron (p=0,04) sobre la producción de CH4 por gramo de materia seca desaparecida, observándosela menor producción para T6, con la mezcla de LIN+EU, en una dosis de 40 + 400 mg/L (Cuadro 1). Dicha reducción coincide con la reducción (p<0,01) de bacterias metanogénicas. Esto no estuvo en detrimento del pH, ya que se mantuvo en 6,7, suficiente para mantener un microbiota estable. No obstante, la DIVMS sí se vio afectada (p<0,01) en el T6, además del T4 y T5, presentando estos tres tratamientos una menor digestibilidad respecto a los tratamientos donde se incluyó únicamente LIN. Conclusiones Se concluye que la mezcla de LIN+EU en la dosis, 40 + 400 mg/L, tuvo la menor producción de CH4, sin afectar el pH, sin embargo, estuvo en detrimento de la digestibilidad. El aceite esencial de EU también afectó la DIVMS. La LIN, en sus dos dosis 20 y 40 mg/L, no tuvo efecto negativo sobre la DIVMS ni el pH. Bibliografía HRISTOV, A.N. OH, J. FIRKINS, J.L., DIJKSTRA, J. KEBREAB, E. and WAGHORN, G. 2013. J. Animal Sci. 91(11):5045- 5069. TILLEY J. and TERRY R.J. Br. Grassl. Soc. 1983; 18: 104-111. ZAVALETA C, ORELLANA C, VERA N, MANTEROLA H, CASTELLARO G. y PARRAGUEZ V. Rev. MVZ Cordoba. 2019; 24(3): 7291-7296. NA 35 Respuestas in vitro de bacterias totales y metanogénicas a la inclusión dietaria de metabolitos secundarios. Zavaleta Córdova, C. 1,4,5 *, Ávila Stagno, J. 2 , Vera Aguilera, N. 2 , Parraguez Gamboa, V. 1,2 , Barra Valdebenito, V. 2 y Jimenes Arriagada, D. 1,4 1 Universidad de Chile, Facultad de Ciencias Agronómicas. Departamento de Producción Animal, Santiago, Chile. 2 Universidad de Chile, Facultad de Ciencias Veterinarias y Pecuarias, Avenida. Santa. Rosa, 11735, Santiago, Chile. 3 Universidad de Concepción, Facultad de Ciencias Veterinarias, Departamento de Ciencia Animal, Vicente Méndez 595, Chillán. Chile. 4 Programa de Doctorado en Ciencias Silvoagropecuarias y Veterinarias, Campus Sur Universidad de Chile. Santa Rosa 11315, La Pintana, Santiago, Chile. CP: 8820808. 5 INIFAP. Km. 25 carretera Chetumal-Bacalar. CP. 77900. Municipio Othón P. Blanco, Quintana Roo, México. *E-mail: zavaleta.maria@inifap.gob.mx In vitro responses of total and methanogenic bacteria to the dietary inclusion of secondary metabolites. Cuadro 1. Efecto de Linamarina (LIN), Eugenol (EU) y la mezcla sobre la producción de gas, CH4 y parámetros ruminales a las 24 h in vitro Tratamientos 1 P Ítem 1 2 3 4 5 6 EEM 2 Gas total, mL 187,8 a 181,3 a 177,3 a 174,4 a 164,2 a 161,0 a 15,24 0,80 CH4, mg/g MSd 7,8 a 6,1 ab 5,6 ab 6,2 ab 4,9 ab 4,0 b 1,01 0,04 pH 6,6 b 6,6 b 6,7 b 6,7 a 6,7 a 6,7 a 0,03 < 0,01 DIVMS, % 52,7 a 52,6 a 51,8 a 46,5 b 46,9 b 46,3 b 1,01 < 0,01 BT, Log10copias/g MS 12,5 a 12,4 a 12,2 a 12,2 a 11,8 a 11,8 a 0,23 0,25 BM, Log10copias/g MS 12,2 a 12,1 a 12,0 a 12,0 a 11,6 b 11,2 b 0,12 < 0,01 a,b Medias con literales diferentes indican diferencias (p≤0,05) 1 T1, Control; T2, LIN (20 mg/L); T3, LIN (40 mg/L); T4, EU (400 mg/L); T5, LIN+EU (20 + 400 mg/L); y T6, LIN+EU (40 + 400 mg/L). 2 Error estándar de la media. BT = Bacterias totales; BM = Bacterias Metanogénicas.