Konstruksi Plasmid pET-15b dengan Gen tat Virus Penyakit Jembrana Plasmid construction pET-15b with the Jembrana Disease Virus tat gene Asmarani Kusumawati 1,2 *, Lalu Unsunnidhal 1,3 , Agung Budiyanto 1 , Erif Maha Nugraha Setyawan 1 , Sri Gustari 1 1 Departemen Reproduksi & Obstetrik, Fakultas Kedokteran Hewan, Jl. Fauna No. 2 Karangmalang, Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta 55281 Indonesia 2 Pusat Studi Bioteknologi, Jl. Teknika Utara, Kocoran, Caturtunggal, Kec. Depok, Kabupaten Sleman, Universitas Gadjah Mada, Daerah Istimewa Yogyakarta 55281 3 Program Studi Ilmu dan Teknologi Pangan, Fakultas Teknologi Pangan dan Agroindustri, Jl. Majapahit No 62, Universitas Mataram, Kota Mataram, Nusa Tenggara Barat, 83361 *Email : uma_vet@ugm.ac.id Diterima : 17 November 2022, direvisi : 6 Maret 2023, disetujui : 7 Maret 2023 Abstract Jembrana disease virus is the virus that causes Jembrana in Bali cattle. Recombinant protein vaccines are made by inserting DNA or genes encoding immunogenic proteins into prokaryotic expression vectors so that they can express the recombinant proteins that will be used as vaccines. One of the structural genes of the Jembrana disease virus is the tat gene which expresses the tat protein which is used as a recombinant protein vaccine. The aim of this study was to clone pET15b with the tat gene. Confirmation of the pET-15b gene in transformant bacteria was carried out by PCR colonies, then plasmid isolation was performed and confirmation was carried out using the PCR method with primers for the detection of the tat gene and sequencing primers for the pET15b vector. The results showed that the transformant bacteria already contained pET15b-tat recombinant DNA which was confirmed through PCR colonies with a band of 179 bp, then further confirmed by PCR on the results of plasmid isolation from transformant bacteria which obtained a band of 179 bp for primers for tat gene detection and 514 bp for sequencing primers on pET15b, 179 bp and 514 bp vectors matched the amplification targets for detection primers and sequencing primers used. Keywords : Jembrana Disease Virus; pET15b; PCR; Recombinant Protein Vaccine; tat protein; Abstrak Virus Penyakit Jembrana adalah virus yang menyebabkan jembrana pada sapi bali. Vaksin protein rekombinan dibuat dengan memasukkan DNA atau gen yang mengkode protein imunogenik ke dalam vektor ekspresi prokariotik sehingga dapat mengekspresikan protein rekombinan yang akan dijadikan vaksin. Salah satu gen struktural virus penyakit jembrana adalah gen tat yang mengekspresikan protein tat yang digunakan sebagai vaksin protein rekombinan. Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengkloning pET15b dengan gen tat. Konfirmasi gen pET-15b pada bakteri transforman dilakukan dengan koloni PCR, kemudian dilakukan isolasi plasmid dan dilaksanakan konfirmasi menggunakan metode PCR dengan primer untuk deteksi gen tat dan primer sekuensing untuk vektor pET15b. Hasilnya menunjukkan bahwa bakteri transforman sudah berisikan DNA rekombinan pET15b-tat yang terkonfirmasi melalui koloni PCR dengan band sebesar 179 bp, kemudian dikonfirmasi lanjut melalui PCR pada hasil isolasi plasmid dari bakteri transforman yang didapatkan band sebesar 179 Jurnal Sain Veteriner, Vol. 41. No. 1. April 2023, Hal. 81-87 DOI : 10.22146/jsv.79217 ISSN 0126-0421 (Print), ISSN 2407-3733 (Online) Tersedia online di https://jurnal.ugm.ac.id/jsv 81