SUMMARY Electrophoretic analysis of extracts from cortical tis- sues of olive trees of cvs ‘Biancolilla’ and ‘Nostrana’ from Sicily (southern Italy) showing bright chrome yel- low discolourations of the leaves, consistently revealed a number of double-stranded RNA (dsRNA) bands, the largest of which had a size (ca 15 kbp) similar to that of the full genomic dsRNA of some species of the genus Closterovirus. A segment of 611 nucleotides, showing se- quence homology with the HSP70 homologue gene of Closteroviridae was amplified by RT-PCR from sympto- matic trees of both cultivars, using degenerated primers designed on the conserved phosphate 1 and 2 motifs of the HSP70 homologue gene sequence. Computer-assist- ed phylogenetic analysis showed that the 611 nt HSP70 homologue sequence from olive differed from that of other members of the family Closteroviridae, suggesting that it probably belonged to an undescribed clos- terovirus, for which the tentative name olive leaf yellow- ing-associated virus (OLYaV) is proposed. A set of OLYaV-specific primers was designed which amplified a 383 nt fragment of the HSP70 homologue. RT-PCR assays with these primers detected OLYaV sequences in olive trees with leaf yellowing from some Italian regions (Calabria and Latium) and Jerusalem, and in individuals of an unidentified pseudococcid mealybug species and of the psyllid Euphyllura olivina that had fed on sympto- matic cv. ‘Biancolilla’ trees. No amplification was ob- tained with extracts from controls (symptomless olives and apparently healthy olive seedlings) or from olive trees from other Italian regions (Sardinia, Tuscany) that showed somewhat differing yellowing symptoms. RIASSUNTO PARZIALE CARATTERIZZAZIONE MOLECOLARE ED IDEN- TIFICAZIONE CON RT-PCR DI UN POSSIBILE CLOSTEROVI- Corresponding author: G.P. Martelli Fax: +39.080. 544-2911 E-mail: martelli@agr.uniba.it RUS ASSOCIATO AD INGIALLIMENTI FOGLIARI DEL- L’OLIVO. L’analisi elettroforetica di estratti da tessuti corticali di cv. “Biancolilla” e “Nostrana” di origine si- ciliana con vivaci ingiallimenti fogliari ha rivelato la co- stante presenza di bande di RNA bicatenari (dsRNA), la più grande delle quali aveva dimensioni (ca 15 kbp) analoghe a quelle dei dsRNA dell’intero genoma di al- cune specie del genere Closterovirus. L’uso di primers degenerati comprendenti i motivi fosfatici 1 e 2 della se- quenza del gene HSP70 dei closterovirus ha consentito l’amplificazione mediante RT-PCR di un frammento di 611 nucleotidi da estratti di piante con sintomi di en- trambe le cultivars. Il sequenziamento del frammento amplificato e l’analisi filogenetica comparativa con le sequenze note dei geni HSP70 di altri closterovirus ha dimostrato che la sequenza identificata in olivo differi- sce dalle altre, tanto da far concludere che essa appar- tenga ad un possibile nuovo membro del genere Closte- rovirus, per il quale si propone il nome di virus associa- to all’ingiallimento fogliare dell’olivo (OLYaV). La RT- PCR con primers OLYaV-specifici che amplificano un frammento di 383 nt, ha consentito l’identificazione del- la sequenza virale in olivi con vivaci ingiallimenti foglia- ri presenti in Calabria e Lazio ed a Gerusalemme, non- ché in individui di una specie non identificata di cocci- niglia pseucoccide e dello psillide Euphyllura olivina presenti su di una pianta infetta di cv. “Biancolilla”. La sequenza virale non è stata identificata né nei testimoni (olivi asintomatici e semenzali apparentemente sani) né in piante di origine sarda e toscana con ingiallimenti fo- gliari che differivano da quelli delle altre regioni. Key words: olive, leaf yellowing, closterovirus, diag- nosis, degenerate primers, RT-PCR, HSP70-like pro- tein, sequencing. INTRODUCTION Two disorders denoted ‘leaf yellowing’ (OLY) and ‘yellow mottling and decline’ (OYMD) were recently recorded from two different localities of Sicily (south- ern Italy) in the local olive (Olea europaea L.) varieties Journal of Plant Pathology (1999), 81 (1), 37-45 Edizioni ETS Pisa, 1999 37 PARTIAL MOLECULAR CHARACTERIZATION AND RT-PCR DETECTION OF A PUTATIVE CLOSTEROVIRUS ASSOCIATED WITH OLIVE LEAF YELLOWING S. Sabanadzovic 1 , N. Abou-Ghanem 2 , P. La Notte 2 , V. Savino 2 , G. Scarito 3 and G.P. Martelli 2 1 Istituto Agronomico Mediterraneo, Via Ceglie 9, I-70010 Valenzano, Bari, Italy 2 Dipartimento di Protezione delle Piante, Università degli Studi and Centro di Studio del CNR sui Virus e le Virosi delle Colture Mediterranee, Via G. Amendola 165/a, I-70126 Bari, Italy 3 Istituto di Patologia Vegetale, Universtà degli Studi di Palermo, Viale delle Scienze, I-90133 Palermo, Italy 04 Sabanadzovic 21-09-2004 9:56 Pagina 37