Volume 50, No. 3, 2005 Optimized and Validated Kinetic Spectrophotometric Method for the Determination of Silymarin in Drug formulations Nafisur Rahman 1* , Yasmin Ahmad 1 and Syed Najmul Hejaz Azmi 1 Abstract A simple and sensitive kinetic spectrophotometric method has been developed for the determination of silymarin in drug formulations. The method is based on the oxidation of drug and 3-methyl-2-benzothiazolinone hydrazone hydrochloride (MBTH) with potassium persulfate in alkaline medium and subsequent coupling to form an intensely colored product. The reaction is followed spectrophotometrically by measuring the increase in absorbance with time (for 15 min) at 430 nm. The two-calibration procedures i.e. initial rate and fixed time methods (at 12 min) are utilized for the assay of drug in the concentration range of 16.0- 192.0 μg mL -1 . The results are optimized and validated statistically and through recovery studies. The methods have been successfully applied to the determination of silymarin in pharmaceutical formulations. The results of the proposed methods are compared with those of the reference method by means of point and interval hypothesis tests confirming excellent agreement and showing no significant difference between the proposed methods (initial rate or fixed time) with the reference method. The experimental true bias of all samples is less than ± 2%. Keywords: silymarin, initial-rate method, fixed-time method, pharmaceutical formulations, spectrophotom- etry, validation parameters. Résumé Nous avons développé une méthode spectrophotométrique cinétique simple et sensible pour la détermination de silymarin dans les formulations de médicaments. La méthode est basée sur l’oxydation du produit et de l’hydrochlorure de 3-méthyle-2- benzothiazolinone hydrazone (MBTH) par le persulfate *Author to whom correspondence should be addressed: cht17nr@yahoo.co.in Contribution from: 1 Department of Chemistry, Aligarh Muslim University, Aligarh-202002 Uttar Pradesh, India Received: January 19, 2005 Accepted (in revised form): June 1, 2005 de potassium persulfate en milieu alcalin et un couplage subséquent pour former une produit à coloration intense. La réaction est suivie spectrophotométriquement en mesurant l’augmentation de l’absorbance avec le temps (pour 15 min) à 430 nm. Nous avons utilisé les deux procédures de calibration, soit celle de la vitesse initiale et celle à temps fixe (à 12 min) pour l’analyse du médicament dans la gamme de concentration de 16.0- 192.0 μg mL -1 . Les résultats ont été optimisés et validés statistiquement ainsi que par études de recouvrement. Les méthodes ont été appliquées avec succès pour la détermination du silymarin dans des formulations pharmaceutiques. Les résultats des méthodes proposées ont été comparés avec ceux obtenus par la méthode référence, par les tests de moyenne de point et hypothèse d’intervalle; la comparaison a confirmé l’excellent accord des méthodes et n’a montré aucune différence significative entre les méthodes proposées (vitesse initiale ou temps fixe) et la méthode référence. L’erreur expérimentale vraie se situe à moins de ± 2% pour tous les échantillons. Introduction Silymarin i.e. 3,5,7-trihydroxy-2-[3-(4-hydroxy-3- methoxy phenyl)-2-(hydroxy-methyl)-1,4-benzodioxan- 6-yl]-4-chromanone (CAS: 22888-70-6) is a free radical scavanger and an important antihepatotoxic drug. It has been used for the treatment of liver diseases of differ- ent etiology due to its hepatoprotective activity (1-4), that is considered to involve antioxidation, inhibition of lipid peroxidation and the membrane stabilizing effects. Thus, its broad pharmacological effects have generated a keen interest in the drug and therefore, the analysis of its dosage form is very important. The drug is officially listed in Martindale The Extra Pharmacopoeia (5). The assay of the drug in pure and dosage forms is only listed in the monograph of The Italian Pharmacopoeia which describes UV-vis spec- trophotometric method (6) and therefore requires much