Veterinaria Italiana, 44 (2), 383‐388 © IZS A&M 2008 www.izs.it/vet_italiana Vol. 44 (2), Vet Ital 383 Typing of Brucella field strains isolated from livestock populations in Italy between 2001 and 2006 Elisabetta Di Giannatale (1) , Fabrizio De Massis (1, 2) , Massimo Ancora (1) , Katiuscia Zilli (1) & Alessandra Alessiani (1) Summary The identification of species and biovars of Brucella field strains isolated in outbreaks is essential to fully understand the epidemiology of the disease and to trace sources of infection, thereby improving the outcome of brucellosis eradication programmes. It is important to identify the presence of Brucella strains in livestock populations and to determine the presence of new strains that might previously have been considered exotic. In this study, 732 Brucella strains isolated from livestock were submitted for typing by the Italian Istituti Zooprofilattici Sperimentali to the National Reference Laboratory for brucellosis between 2001 and 2006. Animal species affected, biovars typed and spatial distribution of isolates are discussed. Brucella field strains were identified using both conventional bacteriological methods and molecular techniques. Species identification was performed using the AMOS (AbortusMelitensis OvisSuis)‐polymerase chain reaction. For biovar identification, amplification of omp2a, omp2b and omp31 genes was performed, followed by restriction fragment length polymorphism. Final biovar identification was performed by growth in the presence of basic fuchsin and thionin, using the slide agglutination test with Brucella A– and M– specific antisera. Keywords Brucella, Brucellosis, Epidemiology, Isolation, Italy, Polymerase chain reaction, Typing. Tipizzazione di ceppi di campo di Brucella isolati da animali d’allevamento in Italia tra il 2001 e il 2006 Riassunto L’identificazione di specie e biovariante dei ceppi isolati in focolai di brucellosi è uno strumento essenziale per comprendere pienamente l’epidemio‐ logia della malattia e fornire il supporto al rintraccio delle fonti di infezione, migliorando in tal modo i risultati di un programma nazionale di eradicazione della brucellosi. E’ necessario identifi‐ care quali sono i ceppi di Brucella spp, presenti negli animali d’allevamento e verificare inoltre l’eventuale comparsa di nuovi sierotipi precedente‐ mente considerati esotici. In questo studio sono stati identificati 732 ceppi di Brucella spp., isolati presso i laboratori degli Istituti Zooprofilattici Sperimentali in Italia ed inviati al centro di Referenza Nazionale per Brucellosi dal 2001 al 2006. Vengono illustrate:le specie animali infette, le biovarianti identificate e la distribuzione spaziale degli isolati. I ceppi di Brucella spp. sono stati identificati utilizzando sia metodi convenzionali che metodi molecolari. L’identificazione di specie è stata effettuata utilizzando l’AMOS (abortus‐melitensis‐ ovis‐suis) polymerase chain reaction. L’identif‐ icazione delle biovaranti è stata effettuata mediante amplificazione di omp2a, omp2b e omp31, seguita da RFLP. L’identificazione finale delle biovarianti è stata poi effettuata mediante crescita dei ceppi su agar tionina e agar fucsina e agglutinazione su vetrino con antisiero anti‐A e anti‐M. (1) Istituto Zo o p ro fila ttic o Sp e rim e nta le d e ll’ Ab ruzzo e d e l Mo lise ‘ G . C a p o ra le ’ , Na tio na l Re fe re nc e C e ntre fo r Bruc e llo sis a nd O IE Re fe re nc e La b o ra to ry fo r Bruc e llo sis, Via C a m p o Bo a rio , 64100 Te ra m o , Ita ly e .d ig ia nna ta le @ izs.it (2) C urre ntly se c o nd e d to the Euro p e a n Fo o d Sa fe ty Autho rity (EFSA), La rg o N. Pa lli 5/ A, 43100 Pa rm a , Ita ly