původní práce KLINICKÁ ONKOLOGIE 20 6/2007 377 IDENTIFIKACE POTENCIÁLNÍCH BIOMARKERŮ KARCINOMU PRSU METODOU SELDI-TOF MS IDENTIFICATION OF POTENTIAL BIOMARKERS OF BREAST CANCER BY SELDI-TOF MS Brožková K. 1 , Knoflíčková D. 1 , Hernychová L. 5 , Bouchal P. 1 , Holčáková J. 1 , Michalová E. 1 , Vyzula R. 2 , Žaloudík J. 3 , Valík D. 4 , Nenutil R. 1 , Vojtěšek B. 1 1 MASARYKŮV ONKOLOGICKÝ ÚSTAV, ODDĚLENÍ KLINICKÉ A EXPERIMENTÁLNÍ PATOLOGIE, BRNO 2 MASARYKŮV ONKOLOGICKÝ ÚSTAV, KLINIKA KOMPLEXNÍ ONKOLOGICKÉ PÉČE, BRNO 3 MASARYKŮV ONKOLOGICKÝ ÚSTAV, ODDĚLENÍ CHIRURGICKÉ ONKOLOGIE, BRNO 4 MASARYKŮV ONKOLOGICKÝ ÚSTAV, ODDĚLENÍ LABORATORNÍ MEDICÍNY, BRNO 5 UNIVERZITA OBRANY, FAKULTA VOJENSKÉHO ZDRAVOTNICTVÍ, ÚSTAV MOLEKULÁRNÍ PATOLOGIE, HRADEC KRÁLOVÉ Souhrn Východisko: Včasná diagnóza a rychlé nasazení cílené terapie jsou klíčovými faktory úspěšnosti léčby nádorových onemocnění. Snaha o nalezení nových biomarkerů pro včasnější diagnostiku, bližší určení subtypu nádoru, výběr optimálního léčebného protokolu a stanovení prognózy odpovídavosti na léčbu stále zůstává jedním z hlavních cílů výzkumu v této oblasti. V naší studii jsme se zaměřili na diferenciální analýzu proteinových expresních profilů nádorové a normální tkáně 105 pacientek s diagnózou karcinomu prsu. Metody a výsledky: Lyzáty tkání byly analyzovány metodou SELDI-TOF MS s využitím čipů s povrchem chelatujícím měďnaté kationty (IMAC 30). Intenzity signálů odpovídající jednotlivým proteinům vzorku byly statisticky hodnoceny pomocí Wilcoxonova testu na hladině významnosti p<0,01. Bylo nalezeno 28 signálů se signifikantně vyšší hodnotou intenzity v nádorové tkáni a 18 signálů o vyšší intenzitě v normální tkáni prsu. Metodou peptidového mapování (PMF) byl identifikován protein specifický pro normální tkáň s charakteristickým signálem o molekulové hmotnosti 15841 Da jako b-řetězec hemoglobinu. Závěr: Analýza metodou SELDI-TOF MS prokázala významné rozdíly v hmotnostních spektrech proteinů exprimovaných v nádorové a normální tkáni. Na základě získaných spekter bylo možno vytipovat charakteristické píky označující proteiny, jenž lze považovat za potenciální biomarkery onemocnění a které by mohly v budoucnosti poskytnout přesnější pohled na klasifikaci nádorů a tím i na jejich diagnostiku a terapii. Klíčová slova: SELDI-TOF-MS, biologický marker, karcinom prsu, beta-Globin Summary Backgrounds: Early diagnosis and immediate therapeutic interventions are crucial factors for successful cancer treatment. New biomarkers are needed for timely diagnosis, more precise histopathological classification or for prediction of treatment response. Our study was aimed at the differential analysis of protein expression profiles of cancer and non-cancer tissue from 105 patients with breast cancer. Methods and Results: Tissue lysates were analyzed by SELDI-TOF-MS on copper chelating chips IMAC 30. Peak intensities were statistically evaluated by Wilcoxon test with significance defined as p <0,01. 28 peaks are overexpressed in tumour tissue and 18 peaks are overexpressed in normal tissue. Protein with molecular weight 15841 Da was identified as the b chain of haemoglobin by method of peptide mass fingerprint (PMF). Conclusions: Analysis of the protein expression profile by SELDI-TOF- MS is able to provide a new point of view on diagnostic and tumor classification. Further independent studies of new sets of samples are essential for verification of specificity and sensitivity of the presented potential biomarkers. Key words: SELDI-TOF-MS, biological marker, breast cancer, beta-Globin ÚVOD Nádorové onemocnění prsu je každoročně diagnostikováno u milionů žen na celém světě a svým rozšířením se tak řadí k nejčastěji se vyskytujícím formám rakoviny u žen. Představuje také druhou nejčastější příčinu úmrtí žen na nádorové onemocnění. Jedno procento nádorů postihuje také muže. V současnosti je diagnostika karcinomu prsu založena především na zobrazovacích technikách (mamografie, ultrazvuk), jejichž využití v preventivních programech výrazně zlepšilo záchyt časnějších stádií onemocnění. Ačkoli během několika posledních desetiletí došlo k výraznému zvýšení úspěšnosti léčby díky pokroku screeningových programů a adjuvantní terapie (hormonální terapie a chemoterapie), umírá stále mnoho pacientek na