Candida Türlerini Tanımlayan Bir Gerçek Zamanlı Polimeraz Zincir Reaksiyonu Yönteminin Geliştirilmesi Development of a Real-Time Polymerase Chain Reaction Method for the Identiication of Candida Species Harun ACA 1 , Burcu DALYAN CİLO 1 , Gülah Ece ÖZMERDİVEN 1 , Sezcan SALAM 1 , Beyza ENER 1 1 Uluda Üniversitesi Tıp Fakültesi, Tıbbi Mikrobiyoloji Anabilim Dalı, Bursa. 1 Uludag University Faculty of Medicine, Department of Medical Microbiology, Bursa, Turkey. * Bu çalışma, 8. Ulusal Moleküler ve Tanısal Mikrobiyoloji Kongresi (4-7 Haziran 2014, Ankara)’nde poster olarak sunulmuştur. ÖZ Candida türleri, nozokomiyal enfeksiyonların önemli bir sebebi olup, kan kültürlerinde en sık izole edilen dördüncü etkendir. Kan kültürlerinden en sık izole edilen türün Candida albicans olmasına karın, albikans-dıı türlerin görülme sıklıı da giderek artmaktadır. Candida türlerinde antifungal duyarlılık paternleri deiken olabildiinden albikans-dıı türlerin hızlı tanısı, tedavide kullanılacak antifungal ilaçların belirlenmesi açısından önemlidir. Bu çalımada, sık rastlanılan Candida türlerini hızlı bir ekilde kan kültürü örneklerinden saptayabilen, tanımlayabilen ve kantitasyon yapabilen bir gerçek zamanlı polimeraz zincir reaksiyonu (Rt-PCR) testinin gelitirilmesi hedelenmitir. Çalımaya, Haziran-Kasım 2013 döneminde laboratuvarımızda pozitif sonuç alınan 50 ardıık BACTEC (Beckton Dickinson, ABD) iesi dahil edilmitir. Kalite kontrolü amacıyla Sabouraud dekstroz agarda üretilen Candida spp. standart suları (C.albicans ATCC 10231, C.glabrata ATCC 90030, C.tropicalis ATCC 1021, C.krusei ATCC 6258, C.parapsilosis ATCC 22019 ve C.dubliniensis CD36) kullanılmıtır. Ayrıca Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa ve Staphylococcus aureus üreyen BACTEC ieleri çapraz reaktivitenin aratırılması amacıyla çalıılmıtır. DNA izolasyonu, ticari bir kit (Zymo Research, ABD) ile yapılmı; Candida türlerine ait 18S rRNA bölgesini hedef alan primer ve problar kullanılarak Rt-PCR, LightCycler 480 (Roche, Almanya) cihazında gerçekletirilmitir. Reaksiyon karıımı; 20 μl hacimde 2 μl DNA, 2 μl LightCycler Fast Start DNA Master Probe (Roche Diagnostics, Almanya), 2 μl MgCl 2 (5 mmol), 2 μl 10x PCR tamponu (Roche Diagnostics, Almanya), 0.5 μl her bir primerden (0.01 nmol/μl) ve 1 μl prob 1 ve 2 (0.1 μmol/μl) Geliş Tarihi (Received): 25.08.2014 • Kabul Ediliş Tarihi (Accepted): 06.01.2015 Özgün Çalışma/Original Article İletişim (Correspondence): Yrd. Doç. Dr. Harun Ağca, Uludağ Üniversitesi Tıp Fakültesi, Tıbbi Mikrobiyoloji Anabilim Dalı, 16059 Görükle, Bursa, Türkiye, Tel (Phone): +90 224 295 4113, E-posta (E-mail): drharunagca@yahoo.com Mikrobiyol Bul 2015; 49(1): 56-65