Reduca (Biología). Serie Técnicas y Métodos. 4 (3): 48-78, 2011. ISSN: 1989-3620 48 Curso de cromatografía de líquidos de alta resolución (HPLC): Prácticas de laboratorio y cuestiones teórico-prácticas. Parte III. Práctica de laboratorio: optimización en la separación de compuestos semejantes mediante modificación de la fase móvil Mara Sacristán San Cristóbal. Eva María Díaz Peña. Borja Alarcón Aguareles. Carlos Vicente Córdoba. María Estrella Legaz González. Departamento de Biología Vegetal I (Fisiología Vegetal). Facultad de Biología. Universidad Complutense de Madrid. Avenida José Antonio Novais, 2. 28040 Madrid. España. marasacristan@bio.ucm.es evam.diaz@bio.ucm.es borjaestremera@hotmail.com cvicente@bio.ucm.es melegaz@bio.ucm.es Resumen: En la práctica que se plantea, el alumno debe resolver la separación de una mezcla de seis analitos en sus componentes individuales. Para ello se utilizan mezclas de fase móvil con eluciones isocráticas o en gradiente. El análisis de los resultados sobre factor de capacidad, eficiencia, selectividad y resolución, obtenidos en cada una de las condiciones de análisis, permite concluir las condiciones óptimas de la separación. Una vez elegida la mejor condición de análisis, se predice el orden de elución de los compuestos en función de sus características estructurales, masa molecular y polaridad, principalmente. Palabras clave: Analito. Eficiencia. Elución isocrática. Elución en gradiente. Fase estacionaria. Fase móvil. HPLC. Polaridad. Resolución. Selectividad. Separación. Tiempo de retención. INTRODUCCIÓN El objetivo primario que se persigue en la separación de componentes de una mezcla es la adecuada resolución (R s ) entre los picos, con la mayor pureza y en el menor tiempo posible. El sistema de HPLC debe ser seleccionado sobre la base de las separaciones que interesa realizar, escogiendo fases estacionarias, fases móviles y detectores adecuados y compatibles con la mezcla objeto de estudio. Normalmente, el analito de interés tarda entre 5 y 10 veces más tiempo en recorrer la columna que un analito no retenido, de tiempo muerto (t M ). El t M o V M (volumen muerto) puede ser estimado como se indica a continuación: V M Ldc 2 /2; t M Ldc 2 /2F