55 ANÁLISIS DE LA RESISTENCIA EN POMELO Y LIMÓN MEXICANO TRANSFORMADOS CON EL GEN p25 DEL Citrus tristeza virus RESISTANCE ANALYSIS IN GRAPEFRUIT AND MEXICAN LIME TRANSFORMED WITH the p25 Citrus tristeza virus GEN Emiliano Loeza-Kuk 1* , María A. Gutiérrez-Espinosa 2 , Daniel L. Ochoa-Martínez 3 , Ángel Villegas-Monter 2 , Gustavo Mora-Aguilera 3 , Elvia C. Palacios-Torres 3 , Eugenio Perez-Molphe-Balch 4 1 Campo Experimental Mocochá, Instituto Nacional de Investigaciones Forestales, Agrícolas y Pecuarias. 97454. Km. 25 Carretera Mérida-Motul, Yucatán. 2 Programa de Fruticultura y 3 Fitopatología, Campus Montecillo, Colegio de Postgraduados. 56230. Montecillo, Estado de México. (loeza.emiliano@inifap.gob.mx) (alexge@colpos.mx). 4 Universidad Autónoma de Aguascalientes. Avenida Universidad 940. 20100. Aguascalientes, México. *Autor responsable v Author for correspondence. Recibido: Febrero, 2010. Aprobado: Enero, 2011. Publicado como ARTÍCULO en Agrociencia 45: 55-65. 2011. RESUMEN En el manejo de la tristeza de los cítricos se ha recurrido a patrones tolerantes, pero tienen menor plasticidad que C. aurantium y la protección cruzada es superada en ocasiones por variantes más severas. Una alternativa puede ser plantas transgénicas con resistencia derivada del patógeno (PDR por sus siglas en ingles). Para evaluar la PDR conferida con la transgénesis plantas de Citrus paradisi y C. aurantifolia, transformadas vía Agrobacterium tumefaciens y A. rhizogenes con el gen p25 del Citrus tristeza virus (CTV), fueron mul- tiplicadas en C. aurantium y C. volkameriana e inoculadas por injerto y transmisión con Aphis gossypii con aislamientos mexicanos de CTV para determinar su resistencia. El diseño experimental usado fue completamente al azar en un arreglo en factorial con tres repeticiones por tratamiento. El compor- tamiento de las plantas, evaluado por PCR en tiempo real con SYBR-green para el gen p18, indicó que 90 d después de la inoculación las transgénicas de C. paradisi tuvieron menor concentración del virus que las no transformadas, mientras que C. aurantifolia permitió una replicación similar a las plantas no transformadas. Comportamiento similar se obser- vó in vitro con los mismos materiales. El análisis de los resul- tados sugiere una posible resistencia derivada del patógeno en las líneas de pomelo transgénicas evaluadas. Palabras clave: resistencia derivada del patógeno, cítricos trans- génicos, PCR tiempo real, cuantificación viral. ABSTRACT In citrus tristeza management tolerant rootstocks have been used, but have less plasticity than C. aurantium, and cross- protection sometimes is overcome by more severe variants. An alternative may be transgenic plants with pathogen- derived resistance PDR. To evaluate the conferred PDR with transgenesis plants of Citrus paradisi and C. aurantifolia, transformed via Agrobacterium tumefaciens and A. rhizogenes with the p25 gene of the Citrus tristeza virus (CTV), were multiplied in C. aurantium and C. volkameriana and inoculated by grafting and with Aphis gossypii using Mexican isolates of CTV to determine their resistance. The experimental design was completely randomized in a factorial arrangement with three replicates by treatment. The plant behavior, evaluated by real-time PCR with SYBR  Green for the p18 gene, indicated that 90 d after inoculation, the C. paradisi transgenics had lower virus concentration than those non-transformed, while C. aurantifolia allowed replication similar to non-transformed plants. Similar behavior was observed in vitro with the same materials. The analysis of results suggest a possible pathogen-derived resistance in the transgenic grapefruit lines evaluated. Key words: pathogen-derived resistance, transgenic citrus, real- time PCR, viral quantification. INTRODUCTION T he genetic transformation of citrus species in order to confer resistance to Citrus tristeza virus (CTV) is an option to conventional improvement due to the control in the process of incorporating a gene of interest (Gutiérrez-E. et al., 1997; Pérez-Molphe-Balch and Ochoa-Alejo,