82.395 La aproximación bioquímica clásica en el diagnóstico y, so- bre todo, el control del cáncer se basa en la determinación de la concentración en suero de determinadas proteínas producidas por el tejido tumoral, denominadas marcadores tumorales. Los métodos utilizados requieren el uso de anti- cuerpos específicos, por lo que suelen englobarse bajo el término genérico de inmunoanálisis. Estas técnicas detec- tan proteínas individuales (p. ej., antígeno prostático especí- fico [PSA]) en concentraciones muy bajas (μg/l). El uso de marcadores tumorales para el diagnóstico de cáncer pre- senta conocidas limitaciones de sensibilidad y especifici- dad. Así, las enfermedades benignas relacionadas con el te- jido u órgano en estudio o con el órgano de eliminación del marcador (patología hepática o renal, principalmente) au- mentan su concentración en el suero y disminuyen la es- pecificidad diagnóstica. La sensibilidad diagnóstica de los marcadores tumorales tampoco es del 100% y está relacio- nada con el estadio del tumor: es baja en los estadios inicia- les y aumenta con la progresión tumoral. Estas limitaciones hacen que, en muchos casos, la utilidad de los marcadores tumorales durante el proceso de diagnóstico del cáncer sea limitada y que, en cambio, su mayor utilidad se encuentre en el seguimiento de la enfermedad y en la valoración de la respuesta al tratamiento. Espectrometría de masas aplicada a la proteómica En los últimos años se han desarrollado considerablemen- te las técnicas de análisis múltiple de proteínas (proteómi- ca) mediante espectrometría de masas. Esta tecnología, especialmente la variante conocida como MALDI-TOF-MS (matrix assisted laser desorption/ionization-time-of-flight mass spectrometry), permite el estudio simultáneo del conjunto de proteínas (proteoma) de una muestra biológi- ca (p. ej., el suero humano) mediante el análisis de una propiedad intrínseca de las moléculas: su relación entre masa y carga (m/z). En resumen, este proceso consiste en una ionización de la mezcla de proteínas que se fragmen- tan y producen un patrón específico y reproducible de péptidos que son separados según su relación m/z. El re- sultado del análisis se representa tradicionalmente según su intensidad relativa (en el eje de las coordenadas) y la m/z (en el eje de las abcisas) de cada péptido producido. Este análisis permite, a diferencia de los inmunoanálisis convencionales, el estudio del conjunto de proteínas, y no de un grupo reducido de ellas, e incluso la detección de posibles modificaciones (p. ej., postraduccionales) de és- tas. Un esquema un poco más detallado del proceso del análisis de muestras biológicas mediante espectrometría de masas (EM) sería el siguiente. Previamente al análisis, se requiere la separación de las proteínas de la muestra mediante técni- cas del tipo de la electroforesis bidimensional y/o la cromato- grafía en tándem. A continuación elegiremos las proteínas que, de forma constante en diferentes experimentos, encon- tremos aumentadas o disminuidas al comparar 2 muestras de nuestro interés (p. ej., normal y patológica) (fig. 1). El análisis por EM de estas proteínas aisladas nos dará como resultado un listado con la relación m/z de cada péptido y su intensidad relativa (espectro de masas). Adicionalmente, los espectrómetros de masas más sofisticados pueden aislar cada uno de las fragmentos obtenidos en un espectro de masas, ionizarlos y generar un nuevo espectro de masas. Son los llamados espectros de masas-masas que permiten obtener la secuencia de aminoácidos de un péptido. Comparando el espectro de masas generado con otros dis- ponibles mediante el uso de bases de datos, se puede llegar en muchos casos a la identificación de la proteína. En unos casos, mediante el análisis de la denominada «huella peptí- dica» (peptid mass fingerprinting), que consiste en compa- rar las m/z obtenidas y sus intensidades con las de diferen- tes proteínas almacenadas en bases de datos y en otros, mediante la «secuenciación peptídica», a partir de espec- tros de masas-masas que generan secuencias cortas de aminoácidos de los péptidos en que se ha fragmentado una proteína al ser ionizada. También en este caso, las proteínas que originan este perfil se identican en bases de datos a partir de la secuencia de aminoácidos obtenida. Este tipo de estrategias constituye una herramienta potente para la identificación de nuevos marcadores biológicos de enfermedad, aunque su utilidad en la práctica clínica es, por su complejidad y falta de estandarización, prácticamen- te nula. Si los datos obtenidos son de suficiente interés, se podría plantear la identificación de la proteína cuya concen- tración en el individuo enfermo difiere de la del sano, y el desarrollo de uno o más inmunoanálisis específicos para la determinación sistemática de la concentración sérica de la proteína. Una variante más heterodoxa, desde el punto de vista meto- dológico, es la que ha generado los estudios en que se basa esta revisión. Se trata de la generación de espectros de ma- sas de proteínas, que no han sido sometidas a procesos de separación exhaustivos, de especímenes de suero de indivi- duos de control y de enfermos (grupo de entrenamiento). Una vez obtenidos, se procede a la creación de un algorit- mo de clasificación a partir de las decenas, centenares o miles de picos que se obtiene de la EM, mediante el uso de diferentes aproximaciones bioestadísticas y bioinformáticas. El algoritmo se construye a partir de las diferencias entre in- dividuos control y enfermos de la intensidad de los picos (representativa de la abundancia de un péptido) y su rela- ción m/z (representativa del péptido) (fig. 2), sin que en ese momento se sepa a qué péptido o proteína corresponde un DIAGNÓSTICO Y TRATAMIENTO 29 Med Clin (Barc). 2005;124(5):181-5 181 Diagnóstico precoz del cáncer mediante análisis proteómicos del suero: ¿ficción o realidad? Edgar Zapico Muñiz a , Josefina Mora Brugés b y Francisco Blanco Vaca a,b a Servei de Bioquímica. b Institut de Recerca. Hospital de la Santa Creu i de Sant Pau. Barcelona. España. Este trabajo fue financiado en parte por el FIS C03-08. Correspondencia: Dr. F. Blanco Vaca. Servei de Bioquímica. Hospital de la Santa Creu i de Sant Pau. Antoni Maria Claret, 167. 08025 Barcelona. España. Correo electrónico. fblancova@hsp.santpau.es Recibido el 29-7-2004; aceptado para su publicación el 19-11-2004.