PRO C . ITB Sa ins & Te k. Vo l. 38 A, No . 2, 2006, 89-98 89 Pengaruh Mutasi D802N pada Aktivitas Polimerase DNA Pol I ITB-1 L. Ambarsari 1 , F. Madayanti 1 , M. R. Moeis 2 & Akhmaloka 1* 1 Biokimia, FMIPA Institut Teknologi Bandung 2 SITH, Institut Teknologi Bandung Jl. Ganesha 10 Bandung 40132, Telp. (022)2502103, Abstrak. Gen mutan D802N DNA Pol I ITB-1 telah dikonstruksi dan diekspresi secara heterolog di Escherichia coli. Ekstrak enzim kasar dari mutan ini telah dikarakterisasi dan menunjukkan adanya perbedaan sifat dibanding dengan ekstrak enzim kasar dari protein wild-type. pH dan suhu optimum enzim mutan berturut-turut adalah 9,0 dan 50 o C; Sedangkan enzim wild-type 7,4 dan 65 o C. Perubahan kondisi optimum ini menyebabkan turunnya aktivitas spesifik enzim mutan hingga 2,7 kali , yaitu dari 3,71 unit/mg protein untuk enzim wild-type menjadi 1,34 unit/mg protein untuk enzim mutan. Hal yang sama terjadi pada penentuan nilai K m dan V maks terhadap substrat (dNTP), sehingga effisiensi katalitik (k cat /K m ) enzim mutan menurun ± 2 kali dibanding enzim wild-type. Mutasi D802N pada gen penyandi DNA Pol I ITB-1 menyebabkan afinitas enzim-substrat berkurang sehingga aktivitas enzim menurun dan enzim menjadi kurang stabil. Kata kunci: DNA pol I ITB-1; mutan D802N; karakterisasi; aktivitas spesifik; efisiensi katalitik. Abstract. D802N mutant gene of DNA Pol I ITB-1 was constructed and expressed in Escherichia coli. The crude enzyme was characterized and compared to that the wild-type. The optimum pH and temperature of the mutant was slightly differences with those the wild-type. The optimum pH and temperature of the mutant were 9.0 and 50 o C, while the wild-type were 7.4 and 65 o C, respectively. The differences of the above properties were followed by decreasing of specific activities of the mutant (1.34 unit/mg protein) 2.7 times lower to that the wild-type (3.71 unit/mg protein). Meanwhile the catalytic efficiency (k cat /K m ) of the mutant decreased 2 times lower compared to that the wild-type. Mutation at D802N of DNA pol I ITB-1 caused decreasing on the mutant affinity to the substrate and thus loss activity and instability of the enzyme. Keywords: DNA pol I ITB-1; D802N mutant; characterization; specific activity; catalytic efficiency. *Penulis korespondensi: E-mail: loka@chem.itb.ac.id Makalah diterima redaksi tanggal 16 Mei 2005, revisi diterima tanggal 7 Juni 2006.