TÉCNICAS DE COLORACIÓN BACTERIANA (TINCIÓN DIFERENCIAL) Blas Albor, Camila Maussa, Andrea Rueda, Laura Zuleta Profesor: Antonio Insignares Navarro. Laboratorio de Microbiología, Universidad del Atlántico, Barranquilla 22-03-2017 Grupo 1 __________________________________________________________________ Resumen Existe gran variedad de técnicas de tinción útiles para la visualización y separación de bacterias en función de morfología y constitución celular. Dentro de estas, la técnica de tinción diferencial permite la diferenciación de microorganismos con características superficiales distintas. En esta práctica se utilizó el método de tinción diferencial, a partir del preparado de un frotis usando una muestra de cultivo bacteriano realizado previamente, y usando diversos colorantes como azul de metileno, cristal violeta, safranina, entre otros reactivos. El análisis de la tinción bajo el objetivo de inmersión (100X) permitió visualizar gran cantidad de bacterias del tipo coco, agrupados en forma de diplococos y estafilococos, permitiendo diferenciar una pared celular de tipo Gram positivo. Esto permitió reconocer la importancia de la tinción como método necesario para facilitar la visualización de las bacterias y la diferenciación de los tipos morfológicos de las mismas. ________________________________________________________________________ 1. Introducción Los microorganismos vivos o activos son por lo general incoloros (excepto algas y cianobacterias), por los que no se observarán con facilidad en un microscopio óptico de campo claro por la falta de contraste entre las células y el medio circundante, por lo que es necesario fijarlos y teñirlos en un frotis. Existen diferentes tipos de tinciones: simple, diferencial y selectiva, de acuerdo con el número y tipo de colorantes utilizados y de los objetivos de estudio. Las tinciones diferenciales permiten diferenciar microorganismos con características superficiales distintas, el colorante utilizado pone de manifiesto diferencias entre células bacterianas o entre partes de una misma célula, por lo que requieren más de un colorante o bien ciertos reactivos complementarios para la tinción. Los colorantes más utilizados: azul de metileno, cristal violeta, safranina, son catiónicos y se combinan fuertemente con componentes celulares cargados negativamente, como los ácidos nucleicos y los polisacáridos ácidos (las envueltas externas de los microorganismos están por lo general cargadas negativamente). La más utilizada en bacteriología es la propuesta por el médico danés Christian Gram en 1884, que clasifica los cultivos bacterianos de menos de 24 horas en Gram positivas y Gram negativas. Sobre la base de su reacción a la tinción de Gram, las bacterias pueden dividirse en dos grupos, Gram positivas y Gram negativas (en este caso, los términos positivo y negativo no tiene nada que ver con carga eléctrico, sino simplemente designan dos grupos morfológicos distintos de bacterias). Las bacterias Gram positivas y Gram negativas tiñen de forma distinta debido a las