REACCION EN CADENA DE LA POLIMERASA (PCR): VALlDAClON PARA EL U S 0 EN EL CONTROL DE CALIDAD DE HEMODERIVADOS. Maida Candelario, Felipe ~ o l o * , Marcelo Nazsbal, Ratl A. Poutou, Eladio Arnador y Marisel Quintana. Subdireccidrt de Calidad, Certtro de Irrgenicria GertCtica y Biotecrrologia, Apartado 6162, La Habana 6, C.P. 10600, Cuba. '~aboratorio de Referencia de SIDA, Aparlado 23031,. La Haba~~a 14, Cuba. Reeibido en noviembre 1993. Aprobada en enero de I994 Key words: polymerase chain reaction, HIV1, quality contol, primer SUMMARY The validation results of the polymerase chain reaction. (PCR) used for HlVl DNA detection, in blood-derived pharmaceutical products are presented. Repetihility and specificity were evaluated as well as the use of different DNA quantities of the positive control in order to know what DNA lev21 could be detected and amplified by PCR. Liquid hybridization with HlVl specific probes was used as detection method. It was concluded that PCR for HlVl detection in blood derived products has a specificity abovl 100% and a sensivily of 100 pg of DNA, showing that PCR can be used as quality control method. RESUMEN Se presentan lor resultados de la validacidn de la tCcnica de la reacci6n en cadena de la polimerasa (PCR), empleada para la detecci6n de ADN de HlVl en muestras de productos farmac&uticos derivados de la sangre. Se eval(la la repetibilidad y especificidad del mttodo, asi como el empleo de diferentes cantidades de ADN (control positiuo) con vistas a determinar quC nivel puede set detectado y amplificado por la PCR. El mCtodo de dctecci6n del producto Bmplificado, fue la hibridacidn liquida, utilizando sondas especlficas para el HIVI. La sonda empleada para la detecci6n de HlVl en este tipo de productos result6 tcner 10070 de especificidad, logrando detectar 100 pg de ADN, quc fuc el (Iltimo punto ensayado. por lo quc re concluy6 que la PCR puede utilizarse como tCcnica de Control de Calidad de hemoderivados. INTRODUCCION La PCR es un proceso enzimitico irt vitro a travts del cual un fragment0 de dcido nucleico sirve como molde en la reaccibn, replicdndose varias veces, para dar colno resultado miles de co~ias de esa secuencia (1). Este mttodo ha sido es liberada pot tCcnicas que se basan en la deteccidn dc anticuerpos y que existen pacientcs co~ltan~inados que no presentan anticuerpos (periodo de ventann), se recurrib a la PCR para la tletcccibn de trazas de ADN de HIVl en este tipo de productos (2). En la actualidad existen normas y regulaciones a nivel international que establecen y hacen referencia a la importancia de la validacibn de 10s ~nttodos analiticos. Los formatos y guias para el diseio de las validaciones ha11 sido reportados prevlamente (3-7). Estos protocolos establecen categorias generales dentro de las cuales se ubican 10s mCtodos analiticos (3) yen dependencia de esta ubicacidn y del prop6sito de la tkcliica es que se seleccionan 10s parametros a evaluar. Las categorias propuestas son: metodos cuantitativos para la determinacibo del colnpuesto activo (grupo A), niCtodos cua~~titativos para deter~ninar impurezas (grupo B), mttodos de identificaci6n (grupo C) y mttodos para determinar el limite de i~npurezas(grupo D). La PCR para detectar ADN de HIVl pertenece al grupo C, de ahi que el paremetro Inas importante a evaluar sea la especificidad. r: En el presente trabajo se reporta el estudio de repetibilidad y especificidad de la PCR para la deteccibn de HIVl en hemoderivados, y se hace referencia a la sensihilidad obtenida por el mttodo, o sea el limite de deteccibn. De esta forma se logra garantizar la seguridad y calidad de 10s productos derivados de la sangre, que son evaluados pot tste mttodo. . , utilizado para el diagn6stico de enfermedades MATERIALES METODOS virales producidas por retrovirus, como el HIV1, A) Cnndicinnes de rertcci6n HTLV' OtrOs' debid' a su gran La reacci6n se realiz6 en soluri6n tamp6n de Saiki sin gelatins sensibilidad y especificidad (2). (0.5 M de KCI, 0.1 M de Tris-HCI pH 8.4 y 0.025 M de MgC12). Se Teniendo en cuenta que la sangre utilizada como enlpleamn IW~M de ~NTPS (Boehringer), 1 unidvdes de Taq pol materia prima en la producci6n de he~noderivados (Hcber Biotec) y 20 pM de oligonuclc6tidos cebadore- Copyright O 1994, Sorlednd Iberolatinonn~eriepnn de Bioleenologin Aplicndn n la Salud Ln IIaba#,~, Cuba