ANÁLISIS DE POLIMORFISMOS Y LOCALIZACIÓN CROMOSÓMICA DEL GEN ACIL-COA: DIACILGLICEROL ACILTRANSFERASA 1 (DGAT1) EN PORCINO Anna Mercadé, Luis Varona*, Armand Sánchez y Josep M. Folch. Departament de Ciència Animal i dels Aliments, Facultat de Veterinària, Universitat Autónoma de Barcelona. *Àrea de Producció Animal. Centre UdL-IRTA. 25198 Lleida. INTRODUCCIÓN La Acil-CoA:diacilglicerol aciltransferasa (DGAT) es una enzima microsomal que juega un papel importante en el metabolismo de los glicerolípidos, ya que participa en la fase final de la síntesis de triglicéridos usando como substrato diacilglicerol y acilCoA (Cases et al 1998). Al participar en la síntesis de triglicéridos puede intervenir en la absorción de grasas a nivel intestinal, en su almacenamiento en adipocitos, en el metabolismo energético muscular, en la formación de lipoproteinas o en regulación de la concentración plasmática de triglicéridos (Cases et al 1998). La deficiencia de DGAT en ratones produce resistencia a la obesidad pero sin alterar la síntesis de triglicéridos (Smith et al, 2000). El gen DGAT1 está localizado en el cromosoma humano 8qter (Goureau et al, 1996), siendo esta región homóloga a la región del cromosoma 4 porcino donde se ha detectado un QTL que afecta al metabolismo de ácidos grasos. (Pérez-Enciso et al 2000). La posición de este QTL coincide con la descrita anteriormente por otros autores (Andersson et al, 1994; Wang et al,1998; Walling et al, 1998; Marklund et al, 1999). Un trabajo anterior de nuestro grupo en el que se analizó la composición de ácidos grasos en la F 2 de un cruzamiento entre Ibérico y Landrace, reveló la existencia de un QTL con efectos sobre el porcentaje de ácido linoleico y oleico en esta posición cromosómica. El genotipo Ibérico para el QTL está asociado a un menor porcentaje de linoleico y a un mayor porcentaje de oleico respecto al genotipo Landrace. (Pérez-Enciso,et al 2000). El objetivo del presente estudio era describir polimorfismos del gen DGAT1 en diferentes razas porcinas y establecer su localización cromosómica. MATERIAL Y MÉTODOS Amplificación del gen DGAT1 por RT-PCR: El ARN total se aisló de muestras de hígado pertenecientes a animales de las razas Ibérico, Landrace, Pietrain, Large White y Meisham usando Trizol (Life Technologies). La transcripción reversa se realizó con 1μg de ARN, 0.5 μM de primer (R7 o R16) y 15 U de ThermoScript TM RT en un volumen total de 20 μl ((Life Technologies). Para la reacción de PCR se usaron dos pares de primers el F1-R6 y el F5-R16 (Tabla 1). Las condiciones fueron 1.5 mM MgCl 2 , 200 μM dNTPs, 300 nM de cada primer, 2.6 U Expand High Fidelity PCR (Roche Molecular Biochemicals) en un volumen final de 50 μl. El perfil térmico utilizado consistía en una desnaturalización previa a 95ºC durante 3 min. Seguido de 95ºC 30 s, 60ºC 1 min y 72ºC 2.5 min durante 10 ciclos. 95ºC 30 s, 60ºC 1 min y 72ºC 2.5 min durante 25 ciclos (aumentando 20 s la extensión en cada ciclo). Finalmente una extensión a 72 ºC durante 10 min. El diseño de los primers se realizó a partir de la secuencia del ARNm porcino (número de acceso Genbank AY093657).