250 Artigo Original/Original Article Rev Inst Adolfo Lutz. 2012; 71(2):250-8 Isolation of Staphylococcus from minas frescal type cheese and detection of enterotoxin genes Isolamento de Staphylococcus de queijo minas frescal e detecção de genes de enterotoxinas RESUMO Neste trabalho foi realizado o isolamento de Staphylococcus spp. de queijo minas frescal, e para esta fnalidade foi padronizado um protocolo multiplex PCR (M-PCR) para efetuar a detecção de genes de enterotoxinas clássicas (sea, seb, sec, sed e see) de Staphylococcus aureus, usando-se o gene femA como controle positivo para cepas de S. aureus. Foi testada a detecção direta de bactérias de amostras de queijo minas frescal e do alimento artifcialmente contaminado. Cento e onze colônias (104 coagulase-positivas e sete coagulase-negativas) foram selecionadas e analisadas por M-PCR e, dentre essas, 34 colônias (30.62%) foram positivas para pelo menos um dos cinco genes de enterotoxinas analisados. Os genes que codifcam as enterotoxinas sea e seb foram os mais frequentemente detectados. O estudo de isolamento de estaflococos coagulase-positivos revelaram que 40% das amostras demonstraram contagens bacterianas acima do limite considerado como aceitável pela legislação brasileira. Palavras chave. PCR, Staphylococcus, queijo. ABSTRACT Tis work aimed at isolating Staphylococcus spp. from minas frescal type cheese, and for this purpose a Multiplex PCR (M-PCR) was standardized for detecting the classical Staphylococcus aureus enterotoxin genes (sea, seb, sec, sed and see), using the femA gene as a positive control for S. aureus strains. Bacterial detection directly from the minas frescal type cheese and from artifcially contaminated food was tested. One hundred eleven colonies (104 coagulase-positive and seven coagulase-negative) were selected for performing M-PCR assay. Tirty-four colonies (30.62%) were positive for at least one of the fve enterotoxin genes analyzed; enterotoxins sea and seb were the most frequently detected. Te study on Staphylococci coagulase-positive samples revealed that 40% of the samples showed bacterial counts above the limit established by Brazilian legislation. Keywords. PCR, Staphylococcus, cheese. Juliana de Castro Beltrão da COSTA*, Elaine Ibrahim de FREITAS, Anderson Almeida de LEMOS, Carla de Oliveira ROSAS, Valéria de Mello MEDEIROS, Márcia Barbosa WARNKEN, Neide Hiromi Tokumaru MIYAZAKI in memoriam , Victor Augustus MARIN *Endereço para correspondência: Departamento de Microbiologia, Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Saúde (INCQS), Fundação Oswaldo Cruz (FIOCRUZ), Rio de Janeiro, Brasil. Tel/Fax: (21) 3865-6151 / 2290-0915. E-mail: julibeltcosta@yahoo.com.br Recebido: 27.03.2011- Aceito para publicação: 08.06.2012 RIALA6/1462