ITEA 12: 799-801(2001) EL USO DE LA FECUNDACIÓN IN VITRO PARA LA EVALUACIÓN DE LOS SISTEMAS DE CONGELACIÓN DE SEMEN PORCINO J. Gadea, S. Ruiz, E. Sellés, R. Romar, C. Matás, P. Coy, A. Poto* y B. Peinado* Departamento de Biología Animal (Fisiología Animal). Facultad de Veterinaria. Universidad de Murcia. Fax: 968 364147 e-mail: jgadea@um.es *Centro de Investigación y Desarrollo Agrario y Agroalimentario (CIDA). La Alberca (Murcia) INTRODUCCIÓN Después de 30 años de investigación en los sistemas de congelación del semen porcino, los resultados de fertilidad obtenidos mediante inseminación artificial con semen congelado aún no son suficientemente satisfactorios como para que su uso comercial se haya generalizado. En los últimos años se ha realizado un gran esfuerzo para mejorar la fertilidad del semen congelado (revisado por Holt, 2000). Las vías de mejora han ido dirigidas a optimizar los sistemas de congelación para obtener una calidad seminal aceptable tras la descongelación (nuevos procedimientos de congelación, diluyentes, aditivos, envases, etc.) y a una mejora en la sincronización entre el momento de la inseminación y el de la ovulación. Otro factor muy importante es la evaluación de la calidad del semen descongelado mediante diferentes métodos de análisis in vitro (Woelders, 1990). De todas las técnicas utilizadas, las que mejor predicen la capacidad fecundante son aquellas que estudian la interacción entre los gametos (Larsson y Rodriguez-Martínez, 2000). En la especie porcina se han utilizado diversos sistemas de fecundación in vitro que permiten predecir la capacidad fecundante del semen refrigerado con una elevada precisión (Ivanova y Mollova, 1993; Xu et al., 1998; Gadea et al., 1998a; Gadea y Matás, 2000). Sin embargo, se dispone de escasa información acerca del semen congelado (Wang et al., 1991; Gadea et al., 1998b; Eriksson, 2000). El objetivo de este trabajo es evaluar la capacidad de penetración in vitro y la de fecundación in vivo que presenta el semen congelado de la especie porcina y la relación que existe entre ambas. MATERIAL Y MÉTODOS Los eyaculados obtenidos de tres verracos de fertilidad probada fueron congelados mediante el método descrito por Westendorf et al. (1975), basado en la utilización de un medio con lactosa y yema de huevo. El semen fue envasado en pajuelas de 0.5 ml con una concentración final de 1 x 10 9 espermatozoides/ml, 3% de glicerol y 0.5% de Orvus et Paste. El proceso de descongelación se realizó mediante inmersión en un baño a 50ºC durante 12 segundos y posterior dilución en BTS a 37ºC. La evaluación de la calidad seminal se realizó midiendo los parámetros de motilidad, motilidad progresiva (0-5), estado del acrosoma (NAR), y la integridad de membrana mediante la tinción con eosina-nigrosina (EN) y los fluorocromos diacetato de carboxifluoresceína y ioduro de propidio (DCF). Fecundación in vitro (FIV) Los ovocitos fueron obtenidos a partir de ovarios de cerdas prepúberes sacrificadas en el matadero y fueron sometidos a un proceso de maduración in vitro (MIV) durante 44 horas en medio Waymouth MB 725/1 suplementado (Yoshida et al., 1992; Coy et al., 1999). Tras la MIV, se coincubaron los espermatozoides descongelados (5 x 10 6 espermatozoides/ml) con 20 ovocitos por placa de 2 ml de medio TCM199 (Coy et al., 1999). Tras 18 h de cultivo, los ovocitos se fijaron y tiñeron con lacmoid para determinar la tasa de penetración (%PEN), número medio de espermatozoides por ovocito (E/O), tasa de monospermia (% MON) y tasa de formación del pronúcleo masculino (% PNM).