Production et purification des glycosidases sécrétées par le champignon Neocallimastix frontalis M. HÉBRAUD, M. FÈVRE Laboratoire de Différenciation fongique, U.A. C.N.R.S. 1127, Bâtiment 405, 43, bd du 11-Novembre-1918, 69622 Villeurbanne Cedex, France. Summary. Secretion of fl-glucosidase, fl-fucosidase, /3-xylosidase, CMCase and xyla- nase from the rumen anaerobic fungi Neocallimastix frontalis is induced by the presence of different substrates. The three glycosidases were purified following DEAE Bio-gel A and Ultrogel AcA 34 column chromatographies, preparative isoelectric focusing and polyacry- lamide gel electrophoresis. The molecular weights and pl values of /3-glucosidase, fl-fucosidase and /3-xylosidase determined by gel filtration and isoelectric focusing were estimated to be 120,000, 120,000, and 180,000 daltons and pH 3,85, 3,85 and 4,35 respectively. Plusieurs phycomycètes anaérobies ont été mis en évidence parmi la population microbienne du rumen de différents ruminants. Ces champignons colonisent les fragments de plantes contenus dans le rumen et participent à l’hydrolyse de leurs parois cellulaires (1 ). Des études ont montré qu’ils possé- daient un important équipement enzymatique (2, 3) dont les caractéristiques physico-chimiques (4) et les conditions de production (5) ont été déterminées. Trois glycosidases de la souche Neocallimastix frontalis isolée et identifiée par G. Fonty, du laboratoire de microbiologie à l’I.N.R.A. de Theix ont été purifiées. Ces enzymes sont importantes puisqu’elles produisent les sucres simples direc- tement assimilables par le champignon. Matériel et méthodes. La sécrétion des enzymes lytiques par N. frontalis a été suivie en cultivant le champignon à 39 °C sur un milieu semi-synthétique (6) contenant différents substrats (xylose, cellobiose, lactose, a-sophorose, Avicel, méthyl-D-glucoside), inducteurs de polyosidases chez les champignons aéro- bies. L’activité des fi-glucosidase, /3-fucosidase, fi-xylosidase, CMCase et xyla- nase a été mesurée en utilisant comme substrats les dérivés para-nitrophényls du fi-glucose, !3-fucose, fl-xylose et le xylane et la CMC respectivement (5). La production des glycosidases a été faite à partir de cultures sur milieu semi- synthétique contenant 0,5 % de cellulose Avicel. La purification d’enzymes a été réalisée par chromatographie d’échange d’ions (DEAE Bio-gel A), filtration sur ultrogel AcA 34, puis focalisation isoé- lectrique préparative en gel Sephadex avec des servalyt de pH 3 à 6. Résultats et discussion. Des substrats tels que le cellobiose, l’a-sophorose et le méthyl-D-glucoside, inducteurs spécifiques de la fl-glucosidase, ou la cellulose Avicel, inducteur spécifique des cellulases chez les champignons aérobies, ont