Jurnal Ilmu dan Teknologi Kelautan Tropis, Vol. 8, No. 1, Hlm. 335-344, Juni 2016 @Ikatan Sarjana Oseanologi Indonesia dan Departemen Ilmu dan Teknologi Kelautan, FPIK-IPB 335 KONSTRUKSI VEKTOR BINER GEN KAPPA(κ)-CARRAGEENASE DAN TRANSFORMASI KE Agrobacterium tumefaciens SEBAGAI MEDIA UNTUK PEMBUATAN RUMPUT LAUT TRANSGENIK BINARY VECTOR CONSTRUCTION OF KAPPA(κ)-CARRAGEENASE GENE AND TRANSFORMATION TO Agrobacterium tumefaciens AS MEDIATOR FOR SEAWEED TRANSGENIC GENERATION Muh Alias L.Rajamuddin 1 , Alimuddin 2* , Utut Widyastuti 3 , Enang Harris 2 , dan Emma Suryati 4 1 Jurusan Budidaya Perikanan, Politeknik Pertanian Negeri Pangkep, Pangkep 1 Program Studi Ilmu Akuakultur, Sekolah Pascasarjana, IPB, Bogor 2 Departemen Budidaya Perairan, FPIK, Institut Pertanian Bogor, Bogor 3 Departemen Biologi, FMIPA, Institut Pertanian Bogor, Bogor 4 Balai Riset dan Pengembangan Budidaya Air Payau, Maros *E-mail: alimuddin_alsani@yahoo.com ABSTRACT Increasing of kappa (κ)-carrageenan content in Kappaphycus alvarezii seaweed is potentially be achieved by applying transgenesis technology. This study was performed to obtain a construction of κ-Carrageenase gene and Agrobacterium tumefaciens to carry those construction genes. The κ- Carrageenase (κ-Car) gene was involved in κ-carrageenan biosynthesis. The κ-Car gene sequence was ligated between the 35S CaMV promoter and tNos terminator sequences to generate pMSH/κ-Car expression vector. Transformation of pMSH/κ-Car plasmid to Escherichia coli was performed by heat- shock method, and to Agrobacterium tumefaciens by tri-parental mating method. The results showed that several colonies of E. coli and A. tumefaciens grew in the selective culture mediums containing antibiotic. PCR analysis using primers 35S-Forward and tNos-Reverse with DNA template from those bacterial colonies resulted DNA fragment of about 2,000 bp, the same as the total length of 35S CaMV promoter, κ-Car gene and tNos terminator sequences. Therefore, the construction of pMSH/κ-Car gene was succeeded and a colony of A. tumefaciens transformant carrying pMSH/κ-Car plasmid was successfully produced. Keywords: Agrobacterium tumefaciens, kappa(κ)-Carrageenase gene, transgenesis, vector ABSTRAK Peningkatan kandungan kappa(κ)-karagenan pada rumput laut Kappaphycus alvarezii berpotensi dicapai melalui aplikasi teknologi transgenesis. Penelitian ini dilakukan untuk mendapatkan konstruksi gen κ-Carrageenase, dan Agrobacterium tumefaciens membawa konstruksi gen tersebut. Gen pe- nyandi enzim κ-Carrageenase (κ-Car) berperan dalam biosintesis κ-karagenan. Sekuen gen κ-Car dili- gasi antara sekuen promoter 35S CaMV dan terminator Nos untuk menghasilkan vektor ekspresi pMSH/κ-Car. Ekspresi gen κ-Car pada plasmid pMSH/κ-Car diatur oleh promoter 35S CaMV dan terminator Nos. Transformasi plasmid pMSH/κ-Car ke bakteri Escherichia coli dilakukan meng- gunakan metode heat-shock, sedangkan ke Agrobacterium tumefaciens menggunakan metode tri- parental mating. Hasil penelitian menunjukkan bahwa beberapa koloni bakteri E. coli dan A. tume- faciens tumbuh pada media selektif yang mengandung antibiotik. Analisis PCR dengan templat DNA dari koloni bakteri E. coli dan A. tumefaciens tersebut menggunakan primer 35S-Forward dan tNos- Reverse menghasilkan fragmen DNA berukuran sekitar 2.000 bp, sama dengan total ukuran sekuen promoter 35S CaMV, gen κ-Car, dan terminator tNos. Hal tersebut menunjukkan bahwa konstruksi pMSH/κ-Car telah berhasil dibuat, dan koloni A. tumefaciens transforman positif membawa plasmid pMSH/κ-Car telah dihasilkan. Kata kunci: Agrobacterium tumefaciens, gen kappa(κ)-Carrageenase, transgenesis, vektor