EN LA BÚSQUEDA DE LA ANFETAMINA PERFECTA: LA SUSTITUCIÓN N-ALQUILICA DE 4-METILTIOANFETAMINA REDUCE LA CONTRACTIBILIDAD AÓRTICA IN VITRO 1 Departamento de Ciencias Farmacéuticas, Facultad de Farmacia, Universidad de Valparaíso. 2 Laboratorio de Farmacología y Bioquímica, Facultad de Farmacia, Universidad de Valparaíso. 3 CREAS, Región de Valparaíso, Chile. 4 Laboratorio de Química Biodinámica, Facultad de Ciencias, Universidad de Chile. 5 Escuela de Medicina, Facultad de Ciencias Médicas, Universidad de Santiago de Chile. 6 Centro de Neurobiología y Plasticidad Cerebral, Departamento de Fisiología, Facultad de Ciencias, Universidad de Valparaíso. 7 Núcleo Científico Milenio Estrés y Adicción, Pontificia Universidad Católica de Chile. La 4-metiltioanfetamina (4-MTA) es un análogo sulfurado de anfetamina cuyo mecanismo de acción descrito en la literatura ha demostrado que esta droga aumenta los niveles extracelulares de serotonina (5-HT). Recientemente se ha demostrado que 4- MTA tiene un efecto bloqueante del transportador de dopamina, el cual se ha asociado con efectos recompensantes de esta droga. Sin embargo, el uso prolongado de derivados anfetamínicos, en pacientes adictos, se ha asociado con toxicidad cardiovascular producida principalmente por un incremento sostenido de la liberación de noradrenalina en corazón y vasos sanguíneos. En el presente trabajo se evaluó la actividad vasoconstrictora de dos series homologas derivadas de 4-MTA. La primera serie homologa correspondió a dos derivados alquílicos de 4-MTA: ETA (etiltioanfetamina) y PTA (propiltioanfetamina). La segunda serie homologa estudiada correspondió a tres derivados N-substituidos de 4-MTA: N-Et-MTA (N-etil-p-metiltioanfetamina), N-Alil-MTA (N-Alil-p-metiltioanfetamina) y Di-Me-MTA (N,N- dimetil-p-metiltioanfetamina). Con este propósito, se instalaron anillos de aorta de rata (machos Sprague-Dawley; 250-280 g de peso corporal) en un baño de órgano (Myobath II, WPI, USA) que contenía solución buffer Krebs-Henseleit modificado (KHM; pH=7,4; 37°C) con burbujeo constante de gas carbógeno (95% O 2 - 5% CO 2 ). En anillos sometidos a una tensión basal de 1,5 gr y previamente estabilizados mediante contracciones sucesivas con una solución KHM despolarizante (K + 70 mM), se registró la contracción isométrica inducida por la adición acumulativa de cada análogo. Como referente se utilizó fenilefrina (FEN, EC 50 =8,87 x 10 -8 M). Los resultados de las curvas concentración-respuesta muestran que 4-MTA (EC 50 =2,84 x 10 -5 M) y ETA (EC 50 =3,32 x 10 -5 M) son capaces de exhibir una contracción máxima equivalente a aquella inducida por K + 70 mM. PTA (EC 50 =3,55 x 10 -5 M) muestra una respuesta máxima inferior a la producida por K + 70 mM. Respecto a la segunda serie homologa, se observó que N-Et- MTA (EC 50 =3,88 x 10 -6 M) tiene una disminución drástica de su actividad farmacológica comparada con 4-MTA, mientras N-Alil-MTA y Mt-But fueron inactivos en este ensayo. RESUMEN Email: pablo.jara@uv.cl ; ramon.sotomayor@uv.cl Jara, P. 1 ; Araos, P. 2,3 ; Vinet, R. 2,3 ; Iturriaga-Vásquez, P. 4 ; Reyes-Parada, M. 5 ; Sotomayor-Zárate, R. 6,7 METODOLOGIA RESULTADOS Se emplearon ratas macho Sprague-Dawley de igual edad y peso entre 250 y 280 g. Los animales fueron sacrificados por depresión respiratoria inducida por anestesia con éter etílico. Luego se realizó una disección en la sección torácica, retirando todos los órganos internos, para posteriormente extraer de forma rápida una sección de la aorta torácica descendente, que fue colocada en una cápsula de Petri con solución buffer Krebs- Henseleit modificado (KHM) (pH=7,4) y burbujeo constante con gas carbógeno (95% de O 2 y 5% de CO 2 ). Luego de remover el tejido periarterial (grasa y tejido conectivo) de la aorta, se cortaron dos anillos concéntricos (4-5 mm) los cuales fueron sometidos a un procedimiento mecánico para eliminar su endotelio (Vinet R. et al, Gen Pharmacol. (1991) 22(2):365-9; Gen Pharmacol. (1991) 22(1):137-42). FIG. 1. Curva concentración respuesta de análogos de 4-metiltioanfetamina (4-MTA): FEN (EC 50 =8,87 x 10 -8 M), MTA (EC 50 =2,84 x 10 -5 M, ETA (EC 50 =3,32 x 10 -5 M) y PTA (EC 50 =3,55 x 10 -5 M). CONCLUSIONES  4-MTA es una droga que produce contractibilidad aórtica, sin embargo su potencia es 340 veces menor que fenilefrina (FEN).  La sustitución etílica y propílica en la posición 4 del anillo tiofenólico de MTA, no afecta su eficacia en inducir contractibilidad aórtica.  La sustitución N-etílica reduce drásticamente la eficacia de 4-MTA en inducir contractibilidad aórtica.  La sustitución en el carbono alfa (MT-But), anulan la capacidad de 4-MTA en inducir contractibilidad aórtica. MTA ETA PTA N-Et-MTA Di-Me-MTA N-Alil-MTA FIG. 2. Curva concentración respuesta de análogos de 4-metiltioanfetamina (4-MTA): N-Et-MTA (EC 50 =3,88 x 10 -6 M), Di-Me-MTA, N-Alil-MTA y MT-But. Mt-But Los anillos fueron montados entre dos ganchos de acero, que se introdujeron en un baño de órgano (Myobath II, WPI, USA) que contenía solución KHM (pH=7,4) con burbujeo constante con gas carbógeno a una temperatura de 37ºC. Uno de los ganchos de acero se unió a un transductor de fuerza, el cual estaba conectado a un conversor análogo-digital, para el registro de la tensión isométrica. Los anillos fueron equilibrados en el baño de tejido, donde se ajustó la tensión basal a 1,5 g. Una vez montados se procedió a estabilizar el sistema por 60 minutos, cambiando la solución KHM, cada 15 minutos, para evitar la formación de metabolitos. Para comprobar la viabilidad de la preparación, los anillos se contrajeron con una solución despolarizante (K + 70 mM) al menos tres veces hasta que la preparación alcanzó una respuesta máxima estable. Luego de este procedimiento se agregó en dosis acumulativas cada uno de los análogos de manera de construir curvas concentración respuesta (CCR) en el rango de 10 -9 a 10 -4 M. Para cada análogo se hizo ensayos por duplicado con un tamaño de muestra de 4 animales. A partir de cada CCR se determinó la concentración efectiva 50% (CE 50 ; la concentración que indujo el 50% de la contracción máxima), utilizando para ello una regresión no lineal para una función sigmoidea mediante el programa GraphPad Prism 5.0 (Graph Pad Software, Inc, USA). INTRODUCCION Financiamiento: Proyecto MECESUP UVA0401, CREAS/CONICYT-Regional GORE Valparaíso (Proyecto R06I1004) y Proyecto FONDECYT N°109-0037 . La 4-metiltioanfetamina (4-MTA) gano notoriedad a finales de los 90 por ser una droga de abuso conocida, como “flatliner”. Esta droga ha sido asociada con intoxicaciones severas y muerte (European Monitoring Centre for Drugs and Drug Addiction (EMCDDA), 1999). El potencial recompensante de 4-MTA ha sido demostrado a través del aumento de la liberación de 5-HT (Gobbi M. et al. J Neurochem (2002) 82: 1435-1443; Gobbi M. et al. J Neurochem (2008) 105: 1770-1780) y recientemente a través de sus efectos dopaminérgicos (Sotomayor-Zárate, R. et al. Basic Clin Pharmacol Toxicol. (2012) Jul ). Las anfetaminas han demostrado ser uno de los medicamentos más eficaces en la terapia del deficit atencional con hiperactividad, sin embargo sus efectos adversos cardiovasculares y el riesgo de producir dependencia, han limitado su uso. Los objetivos de este trabajo fue evaluar dos series homologas derivadas de 4-MTA en el modelo de contractibilidad aórtica que representa sus posibles efectos cardiovasculares. En etapas posteriores esperamos evaluar efectos centrales de estos derivados, como liberación de dopamina y actividad locomotora. View publication stats View publication stats