BACTÉRIAS ASSOCIADAS AO FEIJÃO CAUPI (Vigna unguiculata): ISOLAMENTO E BIOPROSPECÇÃO DE BACTÉRIAS METILOTRÓFICAS FACULTATIVAS Pedro Avelino Maia de Andrade 1 , Fernando José Freire 2 , Júlia Kuklinsky-Sobral 3 , Michelangelo de Oliveira Silva 4 , Diogo Paes da Costa 5 , Marisângela Viana Barbosa 5 , & Maria Camila de Barros Silva 5 ________________________ (1) Aluno de Graduação em Agronomia da Unidade Acadêmica de Garanhuns, Universidade Federal Rural de Pernambuco. Av. Bom Pastor, s/n, Boa Vista, Garanhuns, PE, CEP 55296-901. E-mail: pedro890@hotmail.com 2. Professor Adjunto do Departamento de Agronomia, Universidade Federal Rural de Pernambuco. Rua Dom Manuel de Medeiros, Dois Irmãos, Recife, PE, CEP 52171-900. 3. Professora Adjunta da Unidade Acadêmica de Garanhuns, Universidade Federal Rural de Pernambuco. Av. Bom Pastor, s/n, Boa Vista, Garanhuns, PE, CEP 55296-901. 4. Doutorando do PPG em Ciência do Solo, Universidade Federal Rural de Pernambuco. Rua Dom Manoel de Medeiros, s/n, Dois Irmãos, Recife, PE, CEP 52171-900. 5. Alunos de Graduação em Agronomia da Unidade Acadêmica de Garanhuns, Universidade Federal Rural de Pernambuco. Av. Bom Pastor, s/n, Boa Vista, Garanhuns, PE, CEP 55296-901. Apoio financeiro: CNPq e FACEPE. Introdução O feijão caupi [Vigna unguiculata (L.) Walp.], também conhecido como feijão-de-corda ou feijão macassar, é uma leguminosa de alto valor protéico (23 a 25% em média), além de ser fonte de carboidratos, fibra alimentar, vitaminas e minerais, apresenta baixo valor lipídico (2% em média) [1,2]. É uma cultura de extremo valor para a população do Norte e Nordeste brasileiro, principalmente por ser um dos principais componentes da dieta alimentar da população de baixa renda [1]. É uma cultura que responde bem às condições ambientais e sociais oferecidas pela região, tanto pelas altas temperaturas, baixa umidade e precipitação, quanto ao baixo custo de produção e manejo [1]. Contudo, apresenta baixa produtividade, atribuída principalmente a restrições edafoclimáticas e pouca utilização de tecnologias [3]. Neste contexto, diversas pesquisas buscam novas alternativas que propiciem o aumento da produtividade com sustentabilidade. Uma delas é a utilização de microrganismos associados às plantas na produção agrícola, pois os microrganismos desenvolvem relações neutras e simbióticas com as plantas hospedeiras, podendo inclusive contribuir para o crescimento, saúde e desenvolvimento vegetal [4]. As bactérias pertencentes ao gênero bacteriano Methylobacterium constituem um grupo de bactérias metilotróficas facultativas pigmentadas de rosa (Pink- Pigmented Facultatively Methylotrophic Bacteria - PPFMs), que se caracterizam pela capacidade de crescer utilizando compostos com apenas um carbono, como o metanol [5]. Apresenta distribuição em diferentes nichos, mas quando em associação com os vegetais pode contribuir com a indução de resistência sistêmica [6], aceleração da germinação e o crescimento vegetal, além de produzir sideróforos, fixar nitrogênio atmosférico, e outros [7]. Diante do exposto, este trabalho teve o objetivo de isolar bactérias endofíticas, de caule e raiz, e do rizoplano de plantas de feijão caupi e selecionar bactérias metilotróficas facultativas de pigmentação rosa (gênero Methylobacterium -PPFMs) com capacidade de fixar nitrogênio in vitro. Material e métodos A. Material vegetal Foram utilizadas amostras de caules e raízes de plantas de feijão caupi, cultivadas no município de Brejão, PE, (latitude 9 0 1’47,29’’S e longitude 36 0 34’’28,28’’O), na safra de 2008. As amostras vegetais foram coletadas 45 dias após o plantio, sendo identificadas e levadas ao Laboratório de Genética e Biotecnologia Microbiana (LGBM) da Unidade Acadêmica de Garanhuns (UAG/UFRPE) para processamento das análises. B. Isolamento de bactérias Após a coleta, as amostras vegetais foram lavadas em água corrente e separadas em caule e raiz. Para o isolamento de bactérias do rizoplano e endofíticas da folha e da raiz, foi realizado de acordo com Kuklinsky-Sobral et al. [8]. C. Seleção de bactérias metilotróficas facultativas de pigmentação rosa Isolados bacterianos que apresentaram colônias com coloração rosa e borda lisa foram selecionadas. Estes isolados foram purificados por esgotamento e colônias isoladas foram submetidas ao crescimento em meio de cultura MMS (Metanol e Sais Minerais) [1,2g/l K 2 HPO 4 ; 0,05g/l CaCl 2 ; 0,20g/l MgSO 4 .7H 2 O; 0,10g/l NaCl; 1,0mg/l FeCl 3 .6H 2 O; 0,5g/l (NH 4 )2SO 4 ; 5,0μg/l CuSO 4 .5H 2 O;