VIII Simpósio de Pesquisa dos Cafés do Brasil 25 a 28 de novembro de 2013, Salvador – BA _______________________________________________________________________________ ANÁLISE FUNCIONAL DA REGIÃO PROMOTORA DO GENE CcDREB1D DE DOIS GENÓTIPOS DE Coffea canephora POR MEIO DA TRANSFORMAÇÃO GENÉTICA DE Nicotiana tabacum 1 Sinara Oliveira de Aquino 2 , Karoline Estefani Duarte 3 , Gabriel Sérgio Costa Alves 4 , Pierre Marraccini 5,6 , Alan Carvalho Andrade 6 1 Trabalho financiado pelo consórcio Brasileiro de Pesquisa e Desenvolvimento do Café – Consórcio Pesquisa Café, CAPES-COFECUB e INCT-Café (CNPq/FAPEMIG) 2 Bolsista CAPES, Mestranda, sinarinha2009@gmail.com 3 Bolsista CAPES, Mestranda, karollduarte31@gmail.com 4 Bolsista CAPES, Doutorando, gscalves2@posgrad.ufla.br 5 Pesquisador, PhD, CIRAD UMR AGAP, Montpellier – FR, marraccini@cirad.fr 6 Pesquisador, PhD, Embrapa Recursos Genéticos e Biotecnologia, Brasília-DF, alan.andrade@embrapa.br RESUMO: Apesar de alguns estudos em fisiologia vegetal resultarem em uma melhor compreensão dos mecanismos envolvidos na tolerância à seca em cafeeiro, ainda é escasso o conhecimento acerca das alterações metabólicas e moleculares envolvidas na resposta às condições de déficit hídrico nesta espécie. Neste sentido, estudos recentes permitiram a identificação de vários genes candidatos que apresentaram expressão diferencial entre genótipos contrastantes para essa característica. Dentre esses, encontram-se genes integrantes da via de resposta ao estresse hídrico, previamente identificados em outras espécies vegetais, tais como os fatores de transcrição DREB. Resultados prévios obtidos, analisando a expressão relativa do gene CcDREB1D nos clones 14 (tolerante à seca) e 22 (sensível à seca) de Coffea canephora var. Conilon demonstraram expressão diferencial desse gene em folhas de plantas submetidas ou não a seca. Polimorfismos na região promotora do gene CcDREB1D foram também identificados e podem indicar a participação de diferentes haplótipos no controle genético da tolerância à seca. Várias deleções 5’ da região promotora do gene CcDREB1D foram feitas e clonadas no vetor binário pBI101 como objetivo de analisar o papel dos polimorfismos identificados no promotor do gene CcDREB1D na expressão do gene repórter uidA codificando para a β-glucuronidase por meio da transformação genética de Nicotiana tabacum. PALAVRAS-CHAVE: Coffea canephora, DREB, promotor. transformação gênica, tolerância à seca. FUNCTIONAL ANALYSIS OF THE PROMOTER REGION OF THE GENE CcDREB1D OF TWO GENOTYPES OF Coffea canephora THROUGH GENETIC TRANSFORMATION OF Nicotiana tabacum ABSTRACT: Although some studies in plant physiology resulted in a better understanding of the mechanisms involved in drought tolerance in coffee, is still scant knowledge about the metabolic and molecular changes involved in the response of the coffee plant water deficit conditions. In this sense, recent studies have allowed the identification of several candidate genes that showed differential expression between genotypes contrasting to this trait. Among these genes are members of via to respond to water stress, previously identified in other plant species, such as the DREB transcription factors. Previous results obtained by analyzing the relative expression of the gene CcDREB1D of 14 clones (drought tolerant) and 22 (sensitive to drought) of Coffea canephora var. Conilon showed differential expression of this gene in plant leaves under drought or not. Polymorphisms in the promoter region of the gene CcDREB1D were also identified and may indicate the participation of different haplotypes in the genetic control of drought tolerance. Several deletions 5 ' of the promoter region of the gene CcDREB1D were made and cloned in the binary vector pBI101 how to analyze the role of polymorphisms identified in the promoter gene CcDREB1D in uidA reporter gene expression coding for β-glucuronidase by means of genetic transformation of Nicotiana tabacum. KEY WORDS: Coffea canephora, DREB, promoter, genetic transformation, drought tolerance. INTRODUÇÃO As condições climáticas desfavoráveis e a crescente expansão da cafeicultura para regiões marginais contribuem significativamente para a redução da produtividade, tornando à seca o principal estresse abiótico que afeta a produção dos países cafeicultores. Em regiões de cultivo de café sem irrigação, períodos de seca intensa podem representar uma redução de até 80% da área de plantio (DAMATTA e RAMALHO, 2006). No caso de seca severa, a floração pode ser afetada, levando ao aborto de frutos em desenvolvimento, ou até mesmo causar a morte da planta. Como consequência do aumento de temperatura, regiões cafeicultoras podem sofrer também deslocalização geográfica (ASSAD et al., 2004), levando a importantes problemas ambientais, econômicos e sociais. A possibilidade de produção de plantas transgênicas abre novas perspectivas ao melhoramento convencional, permitindo a rápida incorporação de