Metode Kromatograf Cair Kinerja Tinggi Menggunakan Kolom Oktil Silika Fully Endcapped Residual Silanol pada Pemisahan Kotinin dan 3-Hidroksikotinin dalam Sampel Urin (Optimized Method of High Performance Liquid Chromatography using Octyl Silica Fully Endcapped Residual Silanol Column on Separation of Cotinine and 3-Hydroxycotinine in Urine Sample) CHRISTINE PATRAMURTI 1,2* , SUDIBYO MARTONO 3 , SUGIYANTO 4 , ARIEF NURROCHMAD 4 1 Fakultas Farmasi Universitas Pancasila, Srengseng Sawah, Jakarta 12640. 2 Fakultas Farmasi Universitas Gadjah Mada, Sekip Utara, Yogyakarta 55281. 3 Fakultas Farmasi, Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta. Diterima 20 Maret 2012, Disetujui 29 September 2013 Vol. 12, No. 1 JURNAL ILMU KEFARMASIAN INDONESIA, April 2014, hlm. 110-116 ISSN 1693-1831 * Penulis korespondensi, Hp. 085729800913 e-mail: patra@usd.ac.id Abstrak: Kotinin (COT) dan 3-hidroksikotinin (3-HCOT) merupakan metabolit nikotin yang dikeluarkan melalui urin. Perubahan nikotin menjadi COT dan 3-HCOT diperantarai oleh enzim sitokrom P450 2A6 (CYP 2A6). Akitivitas enzim ini dapat diprediksi dari nilai rasio kadar 3-HCOT terhadap COT. Oleh karena itu nilai rasio 3-HCOT terhadap COT banyak digunakan pada studi fenotipe dan polimorfsme enzim tersebut. Pada penelitian ini, isolasi COT dan 3-HCOT dari sampel urin dilakukan dengan teknik isolasi cair-cair secara bertingkat. Analisis simultan COT dan 3-HCOT dilakukan dengan metode Kromatograf Cair Kinerja Tinggi (KCKT) fase terbalik menggunakan kolom oktil silika (C8; Shimadzu 250×4,6 mm, 5µm) fully endcapped residual silanol. Larutan standar internal (SI) yang digunakan adalah asetanilid. Sistem fase gerak yang dapat memisahkan COT, 3-HCOT dan SI adalah campuran metanol : amonium asetat 5mM (50:50) pada kecepatan alir 0,8 mL/menit. Nilai waktu retensi (t R ) ketiga senyawa kurang dari 10 menit, dengan nilai peak tailing factor (t f ) kurang dari 2. Nilai resolusi (Rs) 3-HCOT terhadap COT adalah 2,67, sedangkan nilai Rs COT terhadap SI adalah 8,84. Kata kunci: Kotinin, 3-hidroksikotinin, pemisahan, kolom oktil silika, KCKT. Abstract: Cotinine (COT) and 3-hydroxycotinine (3-HCOT) are nicotine metabolite excreted in urine. Mediated by the enzyme cytochrome P450 2A6 (CYP 2A6), nicotine will be metabolized to COT and 3-HCOT. The activity of CYP 2A6 can be predicted from the ratio 3-HCOT to the COT, therefore the ratio of 3-HCOT and COT can be used as phenotyping and polymorphism studies of the enzyme. In this study, isolation COT and 3-HCOT of urine samples was carried out by liquid-liquid back extraction. Simultaneous analysis of COT and 3-HCOT using High Performance liquid Chromatography (HPLC) was performed by a reversed-phase octyl silica column (C8; Shimadzu 250 × 4.6 mm, 5 μm) fully endcapped residual silanol. The internal standard solution (SI) was acetanilide. The mobile phase which separate COT, 3-HCOT and SI was methanol : ammonium acetate 5 mM (50:50) at a fow rate 0.8 mL/ min. Retention time (t R ) of the three compounds was less than 10 minutes, with peak tailing factor (t f ) was less than 2. The resolution (Rs) 3-HCOT to COT was 2.67, while the Rs COT to SI was 8.836. Keywords: cotinine, 3-hydroxycotinine, separation, octyl silica column, HPLC. 110-116_Christine_ Optimasi HPLC.indd 1 4/29/2014 10:49:22 AM