RESEARCH NOTE SPECIFIC AND CROSS-REACTIVE MONOCLONAL ANTIBODIES   TO THE 89-kDa ANTIGEN OF OPISTHORCHIS VIVERRINI S Sirisinha l , R Chawengkirttikul l , C Tayapiwatana l , C Naiyanetr l , J Waikagul 2 , P Radomyos3 and   GI Podoprigora 4   IDepartment of Microbiology, Faculty of Science, 2Department of Helminthology,   3Department of Tropical Pediatrics, Faculty of Tropical Medicine, Mahidol University, Bangkok, Thailand;   4Department of Immunology, Martsinovsky Institute of Medical Parasitology and Tropical Medicine,   Moscow, CIS.   We previously reported the production of  monoclonal antibodies (MAbs) to somatic (Billings  et aI, 1990) and excretory-secretory (Amornpunt  et aI, 1991) antigens of Opisthorchis viverrini. The  characteristics of the antigens to which these  MAbs reacted are summarized as shown in Table  I. It was not surprising to note that all MAbs to  the worm metabolic products were directed against  the 89-kDa component which was previously  shown to be the predominant protein in the culture  medium in which these adult worms were main- tained. It was unexpected, however, to find that  these MAbs reacted with different structures of  the parasite (Table I). They also varied considera- bly with regard to immunological cross-reactivity  against a number of closely related flukes of man  and animals. Because both Groups I and 2 anti-89  kDa MAbs were highly specific for O. viverrini (Ov), they were tested on a limited scale for their  diagnostic potential (Sirisinha et aI, 1991). The  limited data obtained were highly promising and  therefore a larger scale field trial has been under- taken to further evaluate its value in an epidemio- logical study.  To elucidate the epitopes against which these  MAbs reacted, the chemical nature of the 89-kDa  antigen was first determined. This was done by  subjecting the antigen to SDS-PAGE, blotting  onto a nitrocellulose membrane and staining with  either Amido black (for protein) or Concanavalin  A (for carbohydrate). The results indicated that  the 89-kDa antigen is a glycoprotein. This is not  Correspondence to: Professor Stitaya Sirisinha, Depart- ment of Microbiology, Faculty of Science, Mahidol  University, Rama 6 Road, Bangkok 10400, Thailand.  surprising as the surface tegument for a number of  parasites is known to be highly glycosylated (Sobhon  and Upatham, 1990). In order to determine whether  or not the anti-89 kDa MAbs were directed against  the carbohydrate moiety, a periodate oxidation  experiment was performed. The 89-kDa ES anti- gen was first subjected to SDS-PAGE and blotted  on a nitrocellulose membrane as mentioned above  and the membrane was subsequently exposed to  50 mM sodium period ate at pH 4.5 for one hour  at room temperature (Woodward et aI, 1985). The  membrane was then rinsed and pretreated with  1 % glycine prior to being exposed to the MAbs.  Positive immunoblotting reaction failed to appear,  indicating that thereactive epitope was destroyed  by periodate treatment. Thus, these MAbs appeared  to be directed toward the carbohydrate moiety of  the 89-kDa glycoprotein antigen.  The summary presented in Table I pointed out  one additional interesting finding. That is, our  muscle-reactive MAbs (anti-90 kDa and Group 3  anti-89 kDa) cross-reacted with a large number of  closely related flukes. This is not entirely unexpected  because one should expect the muscle tissues  of these flukes to be highly conserved, particularly  among the O. viverrini, O. felineus and Clonorchis sinensis. However, more recently Chaicumpa and  associates (1991) reported the production of highly  O. viverrini-specific MAbs that also reacted with  the muscle system and yet failed to react with even  its close relative, O. felineus (Table 1). Some of  these MAbs gave multiple bands by immunoblot- ting. It was, however, difficult to be certain of the  exact location of these MAbs on the muscular  system because the different parasite tissues could  not be readily demonstrated from the photographs.  Vol 23 No 3 September 1992 489