Comunicação Breve/Brief Communication 161 Maristela Marques SALGADO, Maria Gisele GONÇALVES, Fabio Takenori HIGA, Lucila Okuyama FUKASAWA, Priscilla Lima de OLIVEIRA, Carla Naufal da SILVA, Claudio Tavares SACCHI * Endereço para correspondência: Centro de Imunologia, Instituto Adolfo Lutz. Av. Dr. Arnaldo, 355, 11 o andar, CEP: 01246-000, Cerqueira César, São Paulo – SP, Brasil. Tel.: (11) 3068-2899. E-mail: rede.pcr@gmail.com Recebido: 14.09.2012 - Aceito para publicação: 26.06.2013 Rev Inst Adolfo Lutz. 2013; 72(2):161-4 Avaliação de resultados discrepantes obtidos na execução de PCR em tempo real em amostras de pacientes com suspeita clínica de meningite bacteriana Inconsistent results in real-time PCR in analyzing samples from patients with suspected bacterial meningitis RESUMO O princípio básico para obter resultado confável é a compatibilidade entre as réplicas e sua reprodutibilidade. Na rotina diagnóstica por PCR em tempo real (PCR-TR), em que centenas de amostras são processadas, a obtenção de resultados com Cts tardios ou réplicas que diferem entre si por mais de três unidades, são inevitáveis. Das 3.000 amostras processadas em 2010, em duplicata, na rotina diagnóstica das meningites bacterianas por PCR-TR na pesquisa de N. meningitidis, S. pneumoniae e H. infuenzae, 157 (5,2 %), apresentaram inconsistência entre as réplicas (diferença entre Cts maior do que 3) e/ou altos valores de Cts; e os ensaios foram retestados. O presente trabalho investigou estes resultados obtidos, os benefícios destas repetições e as possíveis razões da ocorrência dos resultados discrepantes. Verifcou- se que, apenas 18 (11 %) das amostras submetidas à repetição, apresentaram resultados positivos. Erros humanos inerentes à pipetagem, como o uso de pipetas não calibradas, a baixa concentração de DNA alvo nas amostras, a degradação da sonda ou mesmo a possível contaminação aleatória são fatores que contribuem para induzir resultados discrepantes. A realização do ensaio de PCR-TR com amostras em duplicata e a repetição de ensaios com resultados discordantes é um artifício efciente para avaliar e defnir estes resultados. Palavras-chave. reação em cadeia da polimerase em tempo real, meningite bacteriana, diagnóstico laboratorial, N. meningitidis, S. pneumoniae, H. infuenzae. ABSTRACT Te basic principle for obtaining a reliable result is the consistency found among the replicas and its reproducibility. In a diagnostic routine by using real-time PCR (RT-PCR), when hundreds samples are processed, and results with late Cts or replicas that difer by more than three units are inevitable. Of 3,000 samples processed in 2010, in duplicate, in the diagnostic routine of bacterial meningitis by RT-PCR for detecting N. meningitidis, S. pneumoniae and H. infuenzae, 157 (5.2 %) samples showed inconsistency among replicas (diference between Cts higher than three units) and/or high Cts values; and the samples were retested. Tis study assessed these results, the benefts of its repetitions and probable reasons for the occurrence of these discrepant results. Among the retested samples, 18 (11 %) only showed positive results. Human errors inherent to pipetting, use of non-calibrated pipettes, low concentration of target DNA in the analyzed samples, probe degradation or even random contamination are factors which contribute to induce the discrepant results. Performing RT-PCR assay with samples in duplicate and retesting the samples showing discordant results constitute a device for efciently evaluating and defning these results. Keywords. real-time polymerase chain reaction, bacterial meningitis, laboratory diagnosis, N. meningitidis, S. pneumoniae, H. infuenzae. RIALA6/1558