Génotypage de C. glabrata par de nouveaux marqueurs microsatellites S. Abbes a , H. Sellami a , I. Hadrich a , I. Amouri a , N. Mahfoudh b , S. Neji a , F. Makni a , H. Makni b , A. Ayadi a, * a Laboratoire de biologie mole ´ culaire parasitaire et fongique, faculte ´ de me ´ decine, Sfax, Tunisie b Laboratoire d’immunologie, ho ˆpital Hedi-Chaker, Sfax, Tunisie *Auteur correspondant. Adresse e-mail : ali.ayadi@rns.tn. Candida glabrata a émergé comme un pathogène majeur responsa- ble d’infections superficielles et profondes. Objectif.— Affiner la différentiation génétique des isolats par de nouveaux marqueurs microsatellites. Mate´rieletme´thodes.— Nous avons typé par six marqueurs micro- satellites 85 souches à Candida glabrata (40 hémocultures, six localisations profondes, 36 urinaires et trois vaginales) à partir de malades différents et 118 collectées à partir des mêmes malades au cours d’une étude prospective chez 36 patients (34 patients à candidose urinaire et deux patients à candidose vaginale). Nous avons sélectionnés trois nouveaux marqueurs à partir de la séquence complète du CBS138 et trois précédemment décrit (RPM2, MTI et ERG3). Re´sultats.— Nous avons trouvé que le marqueur GLM5 a représenté le pouvoir de discrimination le plus puissant (ID = 0,788) et RPM2, le marqueur le moins discriminatif (ID = 0,521). Une meilleure diversité génétique a été obtenue (ID = 0,949) en combinant quatre d’entre eux (MTI, ERG3, GLM4 et GLM5). L’application de nouveaux mar- queurs microsatellites GLM4, GLM5 et GLM6 a permis de discriminer 29 isolats, initialement considérés comme identiques, par RPM2, MTI et ERG3. Au cours de suivi réalisé chez les 36 patients, 25 patients (72 %) présentaient des génotypes identiques ou fortement liés (quatre patients ont présentés des microvariations) et 11 patients ont présenté des génotypes différents. Conclusion.— L’analyse par ces marqueurs microsatellites est un moyen de typage utile pour différencier les isolats apparentés et non apparentés et détecter des microvariations. doi: 10.1016/j.mycmed.2011.12.061 Activité in vitro et in vivo de nouveaux dérives de l’albaconazole sur Candida spp. F. Pagniez a, * , R. Guillon b , C. Picot a , F. Morio a,c , C. Loge b , P. Le Pape a,c a EA1155, IICiMed, de ´partement de parasitologie et mycologie me ´ dicale, faculte ´ de pharmacie, universite ´ de Nantes, Nantes Atlantique universite ´ s, Nantes, France b EA1155, IICiMed, de ´ partement de chimie the ´ rapeutique, universite ´ de Nantes, faculte ´ de pharmacie, Nantes Atlantique universite ´ s, Nantes, France c Laboratoire de parasitologie-mycologie, CHU de Nantes, Nantes, France *Auteur correspondant. Adresse e-mail : fabrice.pagniez@univ-nantes.fr. Malgré l’émergence de la classe des échinocandines et l’utilisation de nouveaux triazolés, le traitement des infections sévères dues à Candida spp. demeure un problème préoccupant. Il y a quelques années, l’albaconazole, un nouveau triazole, a été développé avec toutefois une indication restreinte aux candidoses cutanées. Les objectifs de notre travail visaient la synthèse de nouveaux dérivés, analogues structuraux de l’albaconazole, l’évaluation de leurs acti- vités anti-Candida (in vitro et in vivo) ainsi que la confirmation de leur mécanisme d’action. Ces nouvelles thiazoloquinazolinones ont été synthétisées dans notre département de chimie thérapeutique. Leurs activités in vitro ont été évaluées par une technique de microdilution en plaque 96 puits associée à une lecture en spectrofluorimétrie. Neuf souches de Candida spp appartenant à 4 espèces, C. albicans (n = 4), C. krusei (n = 2), C. parapsilosis (n = 2) et C. glabrata (n = 1) ont été sélec- tionnées en fonction de leur niveau de résistance aux azolés et du mécanisme impliqué (mutations sur ERG11, surexpression de ERG11 et/ou des pompes d’efflux). L’activité in vivo a été évaluée dans un modèle murin de candidose systémique. Après l’infection des souris, le traitement a été administré per os (15 mg/kg) pendant cinq jours. La survie des animaux a été étudiée sur une période de 14 jours. En vue de confirmer le mécanisme d’action basé sur l’inhibition de la 14-alpha-déméthylase (ERG11p), le profil des stérols avant et après traitement par l’un des nouveaux composés, d’une souche de C. albicans sensible au fluconazole a été étudié par chromatographie en phase gazeuse couplée à la spectrométrie de masse. Parmi les nombreux dérivés synthétisés, deux sont particulièrement actifs contre les différentes souches de Candida spp. La concentra- tion minimale inhibitrice sur l’ensemble des souches est comprise entre 5 ng/mL et 3 mg/mL pour le composé A, entre 6 ng/mL et 2 mg/ mL pour le composé B, entre moins de 1 ng/mL et 0,3 mg/mL pour l’albaconazole, entre 0,1 mg/mL et supérieur à 30 mg/mL pour le fluconazole, entre 10 ng/mL et 4 mg/mL pour le voriconazole et inférieur à 1 mg/mL pour l’amphotéricine B. L’étude du profil des stérols montre un blocage de la synthèse de l’ergostérol ainsi que l’accumulation de lanostérol et de 14-alpha-méthyl-stérols dont le 14 alpha-méthyl-3,6-diol confirmant que ces nouveaux composés azolés sont des inhibiteurs de ERG11p. Enfin, les composés A et B augmentent significativement la survie des souris (p < 0,001) avec une efficacité similaire à celle du fluconazole et de l’albaconazole. En conclusion, nous décrivons deux nouveaux dérivés de l’albaco- nazole ayant un spectre large d’activité antifongique in vitro sur des souches de Candida spp. sensibles ou résistantes aux azolés. De plus, ces deux inhibiteurs de ERG11p montrent une excellente activité antifongique in vivo dans un modèle murin de candidose systémique. doi: 10.1016/j.mycmed.2011.12.062 Activité de la miltéfosine vis-à-vis du biofilm à Candida albicans chez la souris cathétérisée C. Miossec a,b , É. Guichet a , C. Chauvet a , I. Ourliac-Garnier a , P. Le Pape a,b, * a EA1155, IICiMed, de ´partement de parasitologie et mycologie me ´ dicale, universite ´ de Nantes, Nantes Atlantique Universite ´s, Nantes, France b Laboratoire de parasitologie-mycologie, CHU de Nantes, Nantes, France *Auteur correspondant. Adresse e-mail : Patrice.Le-Pape@univ-nantes.fr. La formation de biofilms à Candida sur la surface de cathéters intravasculaires représente une cause majeure de septicémies noso- comiales. Devant la nécessité d’un traitement efficace précoce en raison des taux de mortalité élevés des candidémies, le retrait du cathéter infecté est recommandé mais souvent impossible dans de nombreuses situations cliniques. La stratégie de verrou thérapeu- tique, seule alternative dans ce cas, est difficile à mettre en œuvre étant donné le faible nombre de molécules efficaces in vitro et l’absence de données suffisantes in vivo. Face au coût élevé de développement de nouvelles molécules, l’utilisation de molécules existantes pour d’autres indications doit être envisagée et évaluée, à la fois in vitro et in vivo. La miltéfosine (1-hexadecylphosphorylcho- line), indiquée pour le traitement des métastases cutanées du cancer du sein (Miltex 1 ) et le traitement des leishmanioses vis- cérales (Impavido 1 ), possède une activité in vitro sur Candida spp. qui pourrait passer, comme l’a démontré précédemment notre équipe, par une action proapoptotique. Par contre, l’activité de la miltéfosine n’a jamais été testée vis-à-vis de biofilms à Candida. Compte rendu de congrès/Proceeding of congress 119