УДК 57.086.83:576.5:591.31:57.083: https://doi.org/10.7124/FEEO.v26.1277 264 ISSN 2415-3826 (Online), ISSN 2219-3782 (Print). Фактори експериментальної еволюції організмів 2020. Том 26 СИРВАТКА В. Я. 1,2 , СЛИВЧУК Ю. І. 2 , ШТАПЕНКО О. В. 2 , ГРОМИКО О. М. 1 , ГЕВКАН І. І. 2© 1 Львівський національний університет імені Івана Франка, Україна, 79005, м. Львів, вул. Грушевського, 4, e-mail: vasyl.syrvatka@lnu.edu.ua 2 Інститут біології тварин НААН, Україна, 79034, м. Львів, вул. Василя Стуса, 38, e-mail: gavkan.iv@gmail.com  vasyl.syrvatka@gmail.com (098) 801-27-68 КОМБІНОВАНА ПРОСТОРОВО-ОРГАНІЗОВАНА СИСТЕМА ДЛЯ ДОЗРІВАННЯ ЯЙЦЕКЛІТИН ТВАРИН IN VITRO © СИРВАТКА В. Я., СЛИВЧУК Ю. І., ШТАПЕНКО О. В., ГРОМИКО О. М., ГЕВКАН І. І. Мета. Метою роботи було створення просторово-організованої клітинної системи для дозрівання яйцеклітин на основі гранульози кролів, гіалуронової кислоти для структурної організації цієї системи та інсуліну як важливо- го фактора росту. Методи. Культивування клі- тин гранульози та дозрівання яйцеклітин in vitro, біохімічне визначення активності лактат- дегідрогенази та концентрації холестеролу, а також визначення концентрації прогестерону та естрадіолу імуноферментним методом. Резуль- тати. Встановлено, що концентрація гіалуро- нової кислоти 0,5 мкг/мл підвищує проліфера- тивну активність клітин гранульози, збільшує концентрацію прогестерону в кондиційному середовищі на 72-гу, а естрадіолу на 48 і 72-гу години культивування. Ступінь дозрівання оо- цитів до метафази-2 становить 85 % за дії 10 мкг/мл інсуліну; ця ж концентрація збільшує інтенсивність проліферації клітин гранульози, а також підвищує рівень естрадіолу, прогестерону та холестеролу в кондиційному середовищі піс- ля 24-ох годин культивування. Висновки. Оп- тимальні параметри комбінованої просторово- організованої культуральної системи становлять 1 млн/мл клітин гранульози з додаванням 0,5 мкг/мл гіалуронової кислоти та 10 мкг/мл інсуліну, що дозволяє створити оптимальні умови для дозрівання яйцеклітин до метафази-2 клітинного циклу. Ключові слова: яйцеклітини, клітини гра- нульози, гіалуронова кислота, інсулін, in vitro. Отримання та дозрівання достатньої кіль- кості яйцеклітин поза організмом є ключовим етапом багатьох біотехнологічних маніпуляцій, зокрема in vitro запліднення, поділу, клонування та отримання трансгенних ембріонів тварин. Більше того, якісне дозрівання ооцитів є важли- вою складовою успішності рутинних методів отримання ембріонів сільськогосподарських тварин та клінічної практики репродуктивної медицини людей [1]. Вкрай важливим завдан- ням ембріональної біотехнології є забезпечення повноцінного дозрівання яйцеклітин поза орга- нізмом, яке визначається максимальним набли- женням умов культивування in vitro до умов in vivo. Вилучення яйцеклітин із фолікулів приз- водить до значних структурних змін та функцій їх ооплазми через відсутність складних регуля- торних систем, що діють в умовах in vivo та впливають на каскади клітинних реакцій. Посе- редниками біологічних сигналів між яйцекліти- нами та залозами внутрішньої секреції є клітини гранульози, більше того, вони здійснюють син- тез та секрецію більшості ростових факторів. Синтетичні середовища для культивування яй- цеклітин не здатні повною мірою забезпечити повноцінне їх дозрівання в умовах in vitro [2, 3]. Тому нами розроблені методи дозрівання ооци- тів та ембріонів на моношарах клітин, зокрема гранульози. Велике значення для розвитку гамет та ембріонів в умовах in vitro має також і прос- торова організація клітин та допоміжні склад- ники, які б ефективно сприяли всебічним міжк- літинним взаємодіям та забезпечували яйцеклі- тини важливими нутрієнтами і ростовими фак- торами [4, 5]. З огляду на це, створення просторово- організованої клітинної системи з оптимальни- ми умовами для дозрівання яйцеклітин та по- шуком нових альтернативних фізико-хімічних чинників здатних, суттєво підвищити кількість та якість дозрівання ооцитів в умовах in vitro, є пріоритетним завданням репродуктивної біоте- хнології тварин [6, 7]. Комбінована просторово- організована клітинна система дозволить не тільки забезпечити більш якісне дозрівання оо- цитів, а й стане важливим інструментом у ви- вченні впливу різних фізико-хімічних чинників на якість гамет in vitro.