JURNAL METAMORFOSA IV (1): 87-93 (2017) J U R N A L M E T A M O R F O S A Journal of Biological Sciences ISSN: 2302-5697 http://ojs.unud.ac.id/index.php/metamorfosa 87 OPTIMASI DIGESTI ENZIM RESTRIKSI SacII PADA ISOLAT Mycobacterium tuberculosis H37Rv UNTUK DETEKSI MUTASI PROMOTER inhA PADA KASUS MDR-TB DENGAN METODE PCR-RFLP DIESTION OPTIMIZATION OF RESTRICTED ENZYME SacII ON Mycobacterium tuberculosis H37Rv ISOLATE FOR THE DETECTION OF PROMOTER MUTATION inhA ON MDR-TB CASE BY PCR-RFLP METHOD Ida Ayu Ratih Dwi Nugraha Putri 1* , Sagung Chandra Yowani 1,2 , I Nengah Wirajana 2,3 1 Jurusan Farmasi FMIPA Universitas Udayana, Bukit Jimbaran, Bali 2 Kelompok Studi MDR dan XDR-TB, FMIPA, Universitas Udayana, Bukit Jimbaran, Bali 3 Jurusan Kimia FMIPA Universitas Udayana, Bukit Jimbaran, Bali *Email: ratihdwinugraha@gmail.com INTISARI Penelitian ini bertujuan untuk melakukan optimasi digesti enzim restriksi SacII pada isolat Mycobacterium tuberculosis H37Rv. Enzim restriksi SacII dengan situs restriksi CCGC^GG diketahui dapat digunakan untuk mendeteksi adanya perubahan nukleotida akibat mutasi pada urutan nukleotida - 24 promoter inhA M. tuberculosis. Mutasi pada posisi tersebut merupakan salah satu penyebab terjadinya resistensi isoniazid. Prosedur penelitian ini meliputi isolasi DNA M. tuberculosis H37Rv, amplifikasi daerah promoter inhA M. tuberculosis H37Rv dengan metode PCR, dan optimasi digesti enzim restriksi SacII. Optimasi digesti dilakukan terhadap formulasi dan waktu digesti. Optimasi formulasi dilakukan dengan menggunakan GM-ONE Buffer dan GM-Buffer IV, sedangkan optimasi waktu digesti dilakukan selama 1 jam, 2 jam, dan 3 jam. Hasil optimasi digesti dengan enzim restriksi SacII menunjukkan bahwa enzim restriksi SacII bekerja lebih optimal pada formulasi menggunakan GM-Buffer IV dibandingkan GM-ONE Buffer dengan waktu inkubasi selama 3 jam. Dengan kondisi digesti optimal, enzim SacII dapat dimanfaatkan untuk deteksi mutasi urutan nukleotida -24 promoter inhA M. tuberculosis pada kasus MDR-TB dengan metode PCR-RFLP. Kata kunci: Optimasi Digesti, PCR-RFLP, Enzim Restriksi, SacII, M. tuberculosis, promoter inhA ABSTRACT The aim of this study was to optimize the digestion process of SacII restriction enzyme in Mycobacterium tuberculosis H37Rv isolate. SacII enzyme that have CCGC^GG restriction site could be used to detect the mutation at -24 promoter region of inhA M. tuberculosis. The mutation in this position is one of the causes of isoniazid resistance. The methods of this study were conducted in several step, respectively: DNA isolation of M. tuberculosis H37Rv, amplification of inhA promoter region of M. tuberculosis H37Rv using PCR method, and digest optimization using SacII. In this study, optimization of SacII digestion was conducted for formulaion and incubation time. The formulation was optimized