Revista Tecnológica. Vol. 15, No. 1, Diciembre 2002 REVISTA TECNOLOGICA 55 PRODUCCION DE ANTICUERPOS POLICLONALES CONTRA EL HONGO CAUSANTE DE LA SIGATOKA NEGRA, Mycosphaerella fijiensis Mauricio Sanchez 1 , Washington Cárdenas 2 , RESUMEN Las pruebas inmunoquímicas constituyen una herramienta de diagnóstico muy utilizada a nivel comercial y de investigación. Estas pruebas son específicas, versátiles, se pueden realizar varias pruebas al mismo tiempo y en tiempo real. El presente reporte presenta los resultados del desarrollo de un método inmuno-diagnóstico para Sigatoka negra, mediante la generación de anticuerpos contra el hongo Mycosphaerella fijiensis. Se produjo dos tipos de antisueros: uno contra ascosporas y otro contra extractos proteicos de sus micelios. La presencia de inmunoglobulinas (anticuerpos) se la realizó por medio de SDS-PAGE y se identificó por medio de su peso molecular aproximado de 150 kDa. Electroforesis en condiciones reductoras sirvió para corroborar la naturaleza de las inmunoglobulinas por medio de dos bandas proteicas de 50 kDa y 25 kDa que corresponden a sus cadenas pesadas y livianas, respectivamente. 1. INTRODUCCION El cultivo de banano es uno de los más importantes a nivel mundial después del arroz, trigo, y maíz. Estas plantas pueden sufrir diversas patologías como son “banana bonchy top disease”, “banana bract mosaic disease”, “banana blood disease”, y “banana black leaf streak disease” (Sigatoka Negra), entre otras. Dentro de las Musaceas, el subgrupo Cavendish (AAA) representa virtualmente la mayoría de las exportaciones en todos los países productores. Variedades del tipo Grand Nain y Williams son especialmente susceptibles a una enfermedad foliar ocasionada por el hongo Mycosphaerella fijiensis llamada Sigatoka Negra. El desarrollo de la enfermedad genera una marcada disminución en la producción bananera por maduración precoz del fruto y reducción de la capacidad fotosintética de la planta debido a la destrucción del tejido foliar. La perdida de la producción puede llegar hasta el 50% (Robinson, 1996). El proceso infeccioso del hongo puede iniciarse a partir de ascosporas o conidios. El ciclo de vida del patógeno depende de las condiciones atmosféricas, huésped, y variabilidad del hongo. El ciclo se inicia con la geminación de esporas producidas en hojas infectadas. Las esporas son diseminadas por acción del agua y el viento para depositarse en nuevas hojas. Con la presencia de agua en las hojas de banano, la germinación se puede producir en menos de dos horas con la formación de tubos germinativos que penetran por los estomas al interior del tejido vegetal. Aunque los mecanismos moleculares de esta interacción no son conocidos en banano, investigaciones con otro hongo patógeno han demostrado que la geminación de conidios es estimulada mediante el contacto con la superficie del huésped (Nielsen et al., 2000). Aunque la Sigatoka se puede presentar donde quiera que se cultive banano o plátano, las condiciones climáticas en zonas cálidas (25-28 o C) y húmedas incrementan la capacidad destructiva de la enfermedad. Las toxinas producidas por M. fijiensis afectan la fisiología de las células del mesófilo y estas entran en un proceso de muerte celular que se expresa en los síntomas de manchas parduscas hasta el color característico de necrosis entre las nervaduras secundarias de la hoja. Dichas manchas son causadas por toxinas como 2,4,8- trihydroxytetralone que tiene la capacidad de producir en menos de 12 horas las lesiones foliares necróticas similares a las del patógeno (Stierle et al., 1991). La presencia de las lesiones 1 Tesista en Biología, CIBE, VLIR-ESPOL 2 Ph.D. Biólogo, Investigador, CIBE, VLIR-ESPOL