AVALIAÇÃO E CARCATERIZAÇÃO DE ERITROPOETINA HUMAN RECOMBINANTE A.C.M. MARINHO 1 , C.M. CONCEIÇÃO 2 , F.S.Q.da SILVA 2 , M. A. P. GIMENES 3 1 BIO-MANGUINHOS/FIOCRUZ, 2 INCQS/FIOCRUZ, Departamento de Química 3 Universidade Federal do Rio de Janeiro, Departamento de Engenharia Bioquímica E-mail para contato: acarolina@bio.fiocruz.br RESUMO – A eritropoetina humana recombinante (EPO-hr) é uma das glicoproteínas terapêuticas mais utilizadas em todo o mundo. A caracterização estrutural detalhada de glicoproteínas deve ser realizada para avaliar a reprodutibilidade lote a lote. Este estudo objetivou caracterizar e avaliar um lote (Lote A) de ingrediente farmacêutico ativo (IFA) de EPO-hr, mediante determinação de concentração de proteínas, massa molar, perfil de isoformas e pureza, utilizando absorção no UV, SDS-PAGE, 2D-PAGE e CLAE-FR, respectivamente. O sequenciamento peptídico foi determinado por espectrometria de massas com fonte de ionização do tipo electrospray e analisadores quadrupolo e TOF (EM-ESI- QTOF). A concentração protéica obtida para o lote A foi de 1,1 mg/mL, massa molar por SDS-PAGE de 40 kDa. O resultado obtido para 2D-PAGE evidenciaram 6 isoformas majoritárias entre pI 4,5 e 6,5. Para o ensaio de pureza, foi encontrado o percentual médio de 99%. Pela técnica EM-ESI-QTOF foi possível identificar o sítio de O-glicosilação na serina. Pode-se, também, inferir que este sítio de O-glicosilação contém o fragmento HexNAc, pois há um incremento de massa de 203 Da entre o íon detectado com modificação e sem modificação. Sendo assim, os resultados obtidos com as diferentes metodologias visando o controle de qualidade e/ou controle em processo possibilitaram um maior entendimento das amostras de IFA de EPO-hr. 1. INTRODUÇÃO A inserção da tecnologia do DNA recombinante, em 1970, com o surgimento das enzimas restrição possibilitou a manipulação genética de micro-organismos, com a clonagem dos genes de proteínas em diferentes sistemas de expressão. Pode-se pleitear então, a obtenção de produtos biológicos, principalmente de biofármacos, em quantidade considerável pelas indústrias farmacêuticas. Assim, foi possível a obtenção das moléculas de interesse em larga escala como, por exemplo, a insulina, viabilizando sua comercialização (WALSH, 2003). Diferentes sistemas de expressão são utilizados para a produção de (bio)medicamentos, sendo cerca de 90% por E. coli, leveduras ou células de ovários de hamster chinês (Chinese Hamster Ovary cells - CHO) (DRANITSARI et al., 2011). Sistemas procariotos, como E. coli, foram os primeiros a serem manipulados para a produção de proteínas de interesse terapêutico, por serem de fácil cultivo e terem alta produtividade quando submetidos a escala industrial. Entretanto, este sistema de expressão não pode ser aplicado à produção de todas as moléculas de interesse, principalmente às proteínas mais complexas, como as proteínas glicosiladas ou glicoproteínas (proteínas que incorporam oligosscarídeos à sua cadeia polipeptídica em uma sequência consenso Área temática: Processos Biotecnológicos 1