Riv Ital Med Lab (2012) 8:121–131 DOI 10.1007/s13631-012-0054-z ARTICOLO ORIGINALE Vitamina D: valutazione di un metodo cromatografico liquido ultra veloce (UPLC) e confronto con tecnica immunometrica e cromatografia liquida a alta prestazione (HPLC) tradizionale Vitamin D: evaluation of an ultrafast liquid chromatography method (UPLC) and its comparison with a traditional immunoassay and high-performance liquid chromatography (HPLC) technique Vincenza Bianchi · Massimo Locatelli · Matteo Vidali · Fabiola Martino · Silvana Piccinini · Antonietta Pinca · Graziano Sida · Carlo Arfini Ricevuto: 1 aprile 2012 / Accettato: 4 giugno 2012 © Springer 2012 V. Bianchi · F. Martino · S. Piccinini · A. Pinca · G. Sida · C. Arfini SC Laboratorio Analisi Azienda Ospedaliera S.S. Antonio e Biagio e C. Arrigo, Alessandria M. Locatelli LABORAF Diagnostica e Ricerca San Raffaele S.p.A., Milano M. Vidali Università del Piemonte Orientale Amedeo Avogadro, Novara M. Vidali () Dipartimento di Scienze Mediche, Università del Piemonte Orientale “Amedeo Avogadro”, Via Solaroli 17, 28100 Novara e Laboratorio Ricerche Chimico Cliniche, Ospedale “Maggiore della Carità”, C.so Mazzini 18, 28100 Novara Tel: +39 0321 660650 (Univ) ; +39 0321 3733246 (Osp) Fax: +39 0321 620421 (Univ); +39 0321 3733516 (Osp) E-mail: vidali@med.unipmn.it In questo studio, utilizzando plasma e siero come matri- ci, abbiamo confrontato un nuovo metodo cromatografi- co liquido ultraveloce (UPLC) con un metodo immuno- metrico e uno cromatografico tradizionale (HPLC). Metodi. 40 campioni di plasma e 50 campioni di siero sono stati valutati tramite kit ClinRep 25-OH-vitamina D2/D3 ® Recipe (BSN Srl, Castelleone, CR, Italia) su strumentazio- ne UPLC Nexera Prominence LC20 (Shimadzu Italia Srl, Milano, Italia). I campioni di plasma sono stati analizzati con kit LIAISON ® 25-OH-Vitamin D Total (DiaSorin SpA, Saluggia, VC, Italia) su strumentazione Liaison Diagnostic System, mentre i campioni di siero sono stati misurati con kit 25-OH Vitamin D3/D2 by HPLC ® Bio- Rad Laboratories Srl (Segrate, MI, Italia) su strumentazio- ne Agilent Technologies (Santa Clara, CA, USA) HPLC serie 1200. Per la valutazione dell’imprecisione e dell’ac- curatezza sono stati utilizzati un controllo a bassa (LC) e alta concentrazione (HC) e un pool di plasma (PN). Risultati. Il metodo UPLC presenta una buona precisione per entrambe le forme di vitamina D (5-7%). Sebbene per livelli bassi di vitamina D l’inaccuratezza si attesta a valori del 2%, per concentrazioni nell’intervallo di nor- malità (>30 ng/ml) essa è pari a 6,5-8,5%. Per il confron- to DiaSorin-UPLC su plasma, l’analisi di Bland-Altman ha mostrato una differenza media percentuale pari a 74,5%, con valori circa doppi per il metodo UPLC rispet- to al metodo DiaSorin, come confermato dall’analisi di regressione di Passing-Bablok (UPLC = DiaSorin*2.38). Per il confronto HPLC-UPLC su siero, l’analisi di Bland- Riassunto Premesse. L’utilizzo di sistemi di cromatogra- fia liquida ultra veloce, non accoppiata a un rivelatore di massa, consentirebbe il dosaggio accurato delle differen- ti forme di vitamina D, proprio dei metodi cromatografi- ci, in tempi rapidi, con produttività simile a quella dei metodi immunometrici, senza richiedere investimenti ini- ziali elevati generalmente tipici dei sistemi LC/MS/MS. 123