Biota Vol. 14 (3): 150-155, Oktober 2009 ISSN 0853-8670 Construction of Soil Metagenomic Library to Obtain Recombinant Clones with an Indigenous Lipase Activity Pembuatan Perpustakaan Metagenom Tanah untuk Mendapatkan Klon Rekombinan dengan Aktivitas Lipase Indigenous Agus Hery Susanto*, Hendro Pramono, Puji Lestari Faculty of Biology, Jenderal Soedirman University Jalan Adipura VI/235 Purwosari Purwokerto 53151 E-mail: susanto1408@yahoo.co.id *Penulis untuk korespondensi Abstrak Penelitian ini bertujuan untuk mengonstruksi perpustakaan metagenom tanah dari sekitar lokasi industri pengolahan minyak kelapa di Kabupaten Banyumas, Jawa Tengah, dalam upaya mendapatkan klon rekombinan dengan aktivitas lipase indigenuos. Penelitian dilakukan di Laboratorium Genetika, Fakultas Biologi, Universitas Jenderal Soedirman mulai bulan Mei hingga Desember 2006. Secara umum tahapan penelitian terdiri atas ekstraksi dan pemurnian DNA tanah, isolasi pUC19, pemotongan DNA tanah, pemotongan dan defosforilasi pUC19, ligasi fragmen-fragmen DNA tanah ke dalam pUC19 untuk menghasilkan molekul DNA rekombinan, dan transformasi sel inang E. coli JM109 menggunakan molekul DNA rekombinan yang diperoleh untuk mengonstruksi perpustakaan metagenom tanah. Pemotongan DNA tanah menghasilkan fragmen-fragmen yang sebagian besar berukuran lebih kurang 5 kb sehingga gen lipase dimungkinkan untuk dibawa di dalamnya. Transformasi sel inang E. coli JM109 memperlihatkan efisiensi 1.7 x 10 5 cfu/μg plasmid. Di antara koloni-koloni yang diperoleh, terdapat 102 koloni berwarna putih, yang menunjukkan keberadaan molekul DNA rekombinan. Koloni putih ini dapat digunakan sebagai materi untuk skrining klon rekombinan dengan aktivitas lipase. Kata kunci: perpustakaan metagenom tanah, pUC19, E. coli JM109, lipase indigenous Diterima: 02 Februari 2009, disetujui: 03 Agustus 2009 Introduction Lipases (E.C. 3.1.1.3) are enzymes catalyzing hydrolysis of lipid or triacylglycerol into glycerol and free fatty acids. These enzymes usually exhibit broad substrate specificity and degrade acyl p-nitrophenyl esters, Tweens and phospholipids, often with positional selectivity, stereoselectivity, and chain length selectivity. They have been recognized as very useful biocatalysts because of their wide-ranging versatility in industrial applications (Saxena et al., 2003; Gupta et al., 2004). To obtain microbial lipases by means of molecular approach are commonly carried out by exploring one of a certain strain of microorganism. With this strategy, it will, however, result in a considerable loss of microorganisms having potential to produce lipases as not all of them could be cultivated using standard techniques known so far (Triana et al., 2007). Only 0.1% of approximately 10 7 cells in a gram of soil sample could be cultivated (Kellenberger, 2001). Recently, a new approach of accessing genetic sources from environmental samples, particularly soil, without need of microorganism cultivation, has been developed. In the so-called as metagenomic approach, the whole genomes of all microorganisms presenting in a certain