414 Posters / Néphrologie & Thérapeutique 12 (2016) 411–418 montré que l’activation d’AhR favorise l’apparition d’un état pro- coagulant. Conclusion Le lien entre PAhRS, PNN et risque thrombotique au cours de l’IRC est à explorer. Déclaration de liens d’intérêts Les auteurs déclarent ne pas avoir de liens d’intérêts. http://dx.doi.org/10.1016/j.nephro.2016.07.267 PMR.07 Détection par spectrométrie de masse des O-glycans de la région charnière des IgA1 et relation avec leur capacité à déposer dans le mésangium rénal A. Druilhe 1,∗ , K. Bathany 2 , C. Oblet 1 , J.C. Aldigier 1 , J.M. Schmitter 2 1 UMR CNRS 7276, CNRS, Limoges, France 2 UMR CNRS 5248, CNRS, Bordeaux, France ∗ Auteur correspondant. Adresse e-mail : anne.druilhe@inserm.fr (A. Druilhe) Introduction Le dépôt mésangial d’IgA1 polymérique non seule- ment caractérise la néphropathie à IgA (N-IgA) mais est également considéré comme une des étapes clés pathogéniques de cette mala- die. Bien que jamais démontré expérimentalement, il est admis qu’un défaut de O-glycosylation de la région charnière de l’IgA1 est responsable de son dépôt. Notre but est de vérifier ce concept. Matériels et méthodes Nous disposons de plusieurs IgA1 mono- clonales pour lesquelles nous connaissons la capacité à déposer dans le mésangium rénal. Des hybridomes ont été produits à partir de splénocytes de souris produisant de l’IgA1 humaine chimérique. Après purification par chromatographie d’affinité, les IgA1 ont été injectées par voie veineuse à des souris puis les reins ont été col- lectés 2 h après injection. L’immunofluorescence sur les coupes de rein a montré que 3 IgA1 chimériques (#1, #5 et #6) sur 10 se déposent dans le mésangium rénal. Par ailleurs, 6 patients atteints de myélome à IgA et présentant des signes d’atteintes rénales ont été biopsiés, ce qui a révélé la présence de dépôts mésangiaux d’IgA chez 4 d’entre eux (patients D) contre 2 n’en présentant pas (patients N). Les IgA purifiées à partir de sérum humain et de surna- geants de culture d’hybridome ont été réduites puis alkylées avant d’être digérées par la trypsine. Le O-glycopeptide [89–126] incluant la région charnière a été analysé par spectrométrie de masse. Résultats Après de nombreuses mises au point nécessaires à la détection fiable des O-glycopeptides, nous avons pu analyser le peptide [89–126] de 5 échantillons : de l’IgA1 polyclonale d’un sujet sain, l’IgA1 monoclonale du patient N1 et celle du patient D1, l’IgA1 chimérique #9 ne donnant pas de dépôt chez la souris et le #6. Les résultats montrent que les IgA1 monoclonales ont une O-glycosylation très hétérogène. Des formes hypogalactosylées sont retrouvées chez le patient D1. Discussion Ce premier résultat, nécessitant confirmation sur un plus grand nombre d’échantillons, est cohérent avec l’hypothèse d’un lien probable de cause à effet entre défaut de O-glycosylation et dépôt mésangial. Conclusion Le travail réalisé a permis de mettre au point les outils nécessaires pour démontrer le lien entre glycosylation et dépôt, et ainsi avancer sur la physiopathologie de la N-IgA. Déclaration de liens d’intérêts Les auteurs déclarent ne pas avoir de liens d’intérêts. http://dx.doi.org/10.1016/j.nephro.2016.07.268 PMR.08 Analyse fonctionnelle de mutations de CLCN5 localisées à proximité du « gating glutamate » et du « proton glutamate » chez des patients atteints par la maladie de Dent Y. Bignon ∗ , N. Frachon , J. Teulon , S. Lourdel Équipe métabolisme et physiologie rénale, centre de recherche des Cordeliers, Paris, France ∗ Auteur correspondant. Adresse e-mail : yohan.bignon@gmail.com (Y. Bignon) Introduction La maladie de Dent est une pathologie rare liée à l’X entraînant une protéinurie de bas poids moléculaire, une hypercalciurie, une néphrolithiase, une néphrocalcinose et une insuffisance rénale progressive. Une mutation de CLCN5, le gène qui encode le transporteur 2Cl - /H + (ClC-5), est retrouvée chez 60 % des patients atteints par la maladie. Dans les reins, ClC-5 est principalement exprimé à la membrane apicale des tubules proxi- maux et dans les endosomes précoces où il permet l’endocytose et l’acidification des endosomes. Deux résidus de ClC-5 jouent un rôle clé dans ses mécanismes de transport : le « gating gluta- mate » (E211) et le « proton glutamate » (E268). Les mutations du gating glutamate entraînent la conversion de ClC-5 en canal Cl - , et celles impactant le proton glutamate abolissent toute son activité électrique [1]. Patients et méthodes Dans cette étude, nous avons analysé 7 mutations de CLCN5 (G212S, P213L, L266V, E267D, S270G, Y272N, F273L) retrouvées chez les patients atteints par la maladie de Dent et localisées à proximité du gating glutamate et du proton glutamate [2]. Pour cela, nous avons mesuré dans des ovocytes de Xénope les courants et l’adressage à la membrane plasmique des protéines sauvages et mutées à l’aide de voltage-clamp en double micro- électrode et de luminescence. L’expression protéique, la maturation et la localisation subcellulaire des mutants ont été analysées à l’aide de cellules HEK293T par western-blot et immunofluorescence. Résultats La plupart des mutations (telles que G212S et S270G) n’altèrent que l’activité électrique de ClC-5 et peuvent donc être regroupées parmi les mutations de classe 1. Deux mutations (P213L et E267D) affectent la maturation de ClC-5 et entraînent sa réten- tion dans le réticulum endoplasmique : ce sont donc des mutations de classe 1. Discussion Diverses publications ont démontré qu’environ 60 % des mutations de CLCN5 conduisent à une rétention dans le réticu- lum endoplasmique. Dans cette étude, nous avons observé que les mutations de classe 1, localisées à proximité du gating glutamate, ne sont pas aussi fréquentes qu’attendu. Conclusion Nos résultats démontrent donc que les mutations de ClC-5 proches de son gating glutamate affectent rarement son trafic intracellulaire. Déclaration de liens d’intérêts Les auteurs déclarent ne pas avoir de liens d’intérêts. Références [1] Lourdel, et al. ClC-5 mutations associated with Dent’s disease: a major role of the dimer interface. Pflugers Arch 2012. [2] Mansour-Hendili, et al. Mutation update of the CLCN5 gene res- ponsible for Dent disease 1. Hum Mutat 2015. http://dx.doi.org/10.1016/j.nephro.2016.07.269 PMR.09 Analyse protéomique quantitative par technique iTRAQ de la néphrotoxicité des inhibiteurs de la calcineurine B. Burat 1 , E. Pinault 2 , J. Gonzalez 1 , P. Marquet 1 , M. Essig 1,∗ 1 UMR Inserm S850, université de Limoges, Limoges, France 2 Scrabl, université de Limoges, Limoges, France ∗ Auteur correspondant. Adresse e-mail : marie.essig@inserm.fr (M. Essig) Introduction Les inhibiteurs de la calcineurine (ICN), ciclospo- rine A (CsA) et tacrolimus (Tac), sont les piliers du traitement immunosuppresseur pour éviter le rejet d’allogreffe. Cependant, leur grande efficacité s’accompagne d’une néphrotoxicité problé- matique pour leur utilisation à long terme. Les mécanismes de cette néphrotoxicité restent majoritairement non élucidés.